形覺剝奪和閃爍光對(duì)C57BL-6J小鼠視網(wǎng)膜基因和蛋白質(zhì)表達(dá)的影響與近視眼發(fā)生機(jī)制研究.pdf

1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文形覺剝奪和閃爍光對(duì)C57BL6J小鼠視網(wǎng)膜基因和蛋白質(zhì)表達(dá)的影響與近視眼發(fā)生機(jī)制研究姓名：李賽群申請學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：鐘興武20090413中山大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要作為空白對(duì)照。其中I組和IⅡ組小鼠采用正常日光燈照明，而II組小鼠暴露于20Hz左右的閃爍光。匹配三組小鼠眼水平的光照度為301u)【，光照周期為12h：12h。視覺處理14天后，斷頸法處死動(dòng)物，分離視網(wǎng)膜，提取視網(wǎng)膜總蛋白，進(jìn)行雙向

2、凝膠電泳。凝膠采用銬瑪斯亮藍(lán)染色后，應(yīng)用ImageMaSter2DPlatin啪50軟件分析凝膠，根據(jù)差異倍數(shù)2倍選取差異表達(dá)蛋白點(diǎn)。切取差異表達(dá)蛋白點(diǎn)用胰酶消化并進(jìn)行MALDIT’OF質(zhì)譜分析和NCBI數(shù)據(jù)庫查詢。選取差異倍數(shù)最大的蛋白點(diǎn)進(jìn)行WesternB10tting驗(yàn)證。結(jié)果：凝膠圖像分析軟件分析顯示，形覺剝奪組實(shí)驗(yàn)眼(FDTreated)和形覺剝奪閃爍光組實(shí)驗(yàn)眼(Flicker1’reated)之間存在5個(gè)差異表達(dá)蛋白。質(zhì)譜分

3、析最后確認(rèn)這5個(gè)蛋白點(diǎn)均歸屬于晶狀體蛋白家族的成員：aA晶體蛋白、晶體蛋白DAl、aA晶狀體蛋白、晶體蛋白pA2、晶體蛋白DAl。然后，通過對(duì)QA晶體蛋白的WeStemBloning驗(yàn)證分析發(fā)現(xiàn)，相對(duì)空白對(duì)照眼(ContmI)，形覺剝奪組實(shí)驗(yàn)眼(FDTreated)視網(wǎng)膜aA晶體蛋白表達(dá)顯著上調(diào)(P：0033)；相反，相對(duì)于形覺剝奪組實(shí)驗(yàn)眼(FDTreated)，形覺剝奪閃爍光組實(shí)驗(yàn)眼(nicker1’reated)視網(wǎng)膜僅A晶體蛋白的

4、表達(dá)下調(diào)。結(jié)論：形覺剝奪和閃爍光已被證實(shí)分別為近視誘導(dǎo)／阻遏的視覺信號(hào)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，形覺剝奪能使aA晶體蛋白等部分晶體蛋白家族成員表達(dá)上調(diào)，相反，閃爍光則下調(diào)這些晶體蛋白家族成員的表達(dá)。這表明，晶體蛋白家族的某些成員可能參與了近視眼眼球生長調(diào)控。本課題的下一步研究將進(jìn)一步深入探討晶體蛋白相關(guān)的蛋白網(wǎng)絡(luò)在近視眼發(fā)生中扮演的角色。(二)形覺剝奪和閃爍光對(duì)視網(wǎng)膜基因差異表達(dá)譜的影響研究目的：采用基因芯片技術(shù)研究短時(shí)間形覺剝奪和閃爍光導(dǎo)致的