5-HT-,2A-、5-HT-,7-受體和甘丙肽在大鼠脊髓Onuf核分布的研究.pdf

1、目的：研究5-HT2A、5-HT7受體和甘丙肽(GAL)在雄性大鼠脊髓Onuf核不同運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元內(nèi)分布及其與泌尿生殖反射中樞調(diào)控的關(guān)系。 方法：成年SD大鼠24只(雄性22只、雌性2只)，隨機(jī)分為性別對(duì)照組(n=6，雄性4只，雌性2只)、HRP組(n=6)和PRV(n=12)組。性別對(duì)照組取脊髓L5-6節(jié)段，切片后分別作5-HT2A、5-HT7受體和GAL免疫組化染色；HRP組用HRP分別注入右側(cè)尿道外括約肌(HRP-EUS組；n

2、=3)或右側(cè)坐骨海綿體肌(HRP-IC組；n=3)，24h后取L5-6節(jié)段，切片后經(jīng)TMB法染色，再結(jié)合5-HT2A或5-HT7受體免疫組化染色，光鏡和電鏡下觀察5-HT2A、5-HT7受體在Onuf核的分布情況。PRV組用重組偽狂犬病毒株(PRV-152)分別注入右側(cè)尿道外括約肌(PRV-EUS組；n=6)或右側(cè)坐骨海綿體肌(PRV-IC組：n=6)，4d后取L5-6節(jié)段，切片后分別作5-HT2A或5-HT7受體或GAL雙標(biāo)記熒光免疫

3、組化染色。熒光顯微鏡或者激光共聚焦顯微鏡下觀察5-HT2A、5-HT7受體和GAL在Onuf核的分布情況。 結(jié)果：性別對(duì)照組見雄性大鼠5-HT2A、5-HT7受體和GAL在Onuf核的免疫表達(dá)明顯強(qiáng)于雌性大鼠；5-HT2A受體的免疫產(chǎn)物主要位于Onuf核背外側(cè)核(DLN)的內(nèi)側(cè)，5-HT7受體則主要位于DLN的外側(cè)，GAL在DLN內(nèi)、外側(cè)均有明顯的免疫反應(yīng)活性表達(dá)。HRP-IC組顯示過氧化物酶標(biāo)記的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元位于同側(cè)DLN的內(nèi)側(cè)

4、，在相同區(qū)域有5-HT2A受體免疫活性表達(dá)；HRP-EUS組見HRP逆行示蹤標(biāo)記的EUS運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元位于同側(cè)DLN的外側(cè)， 5-HT7受體免疫反應(yīng)活性與HRP標(biāo)記的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元重疊。電鏡下可見DLN運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元內(nèi)HRP酶反應(yīng)產(chǎn)物呈針狀結(jié)晶，大多數(shù)5-HT2A受體的免疫標(biāo)記主要位于IC運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元細(xì)質(zhì)膜，其周圍樹突質(zhì)膜上也可查見受體分布。而5-HT7受體免疫產(chǎn)物主要分布在EUS運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞漿內(nèi)線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和Golgi復(fù)合體內(nèi)。PRV組見PRV-

5、152經(jīng)IC逆行示蹤標(biāo)記的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元主要位于同側(cè)DLN的背內(nèi)側(cè)，經(jīng)EUS逆行示蹤標(biāo)記的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元位于同側(cè)DLN的腹外側(cè)；免疫熒光雙標(biāo)記顯示5-HT2A受體的免疫標(biāo)記主要分布于支配IC的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元胞體和突起周圍，5-HT7受體主要位于支配EUS的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元內(nèi)，GAL的免疫標(biāo)記位于EUS和IC的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元內(nèi)。 結(jié)論： 5-HT2A、5-HT7受體不均勻分布在Onuf核支配不同的盆底橫紋肌的運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元；5-HT2A受體主要分布于支配I