人參皂甙Rg1對人牙周膜細胞生物學活性及大鼠牙周組織相關細胞因子表達的影響.pdf

1、目的： 1、研究玻片覆蓋法原代培養(yǎng)人牙周膜細胞的成功率及生物學性狀；在此基礎上研究人參皂甙Rg1對原代培養(yǎng)的人牙周膜細胞生物學活性的影響。 2、通過給Wistar大鼠肌注糖皮質激素及牙間結扎鋼絲建立一種近似人類臨床牙周炎的動物模型，研究人參皂甙Rg1對大鼠實驗性牙周炎模型的牙周組織中白介素6(IL-6)、骨鈣素(BGP)表達的影響。 方法： 1、利用形態(tài)學、免疫組化方法來觀察玻片覆蓋法原代培養(yǎng)人牙周膜細胞

2、的成功率及其生物學特性，并鑒定其來源。 2、在體外培養(yǎng)人牙周膜細胞的基礎上，采用噻唑藍(MTT)比色法、考馬斯亮藍法、酶動力學方法探討人參皂甙Rg1對原代培養(yǎng)的人牙周膜細胞增殖活性、蛋白合成、堿性磷酸酶(ALP)活性的影響。 3、采用流式細胞技術觀察人參皂甙Rg1對體外培養(yǎng)人牙周膜細胞細胞周期的影響。 4、體外培養(yǎng)人牙周膜細胞經鈣熒光指示劑Fluo-3負載后，用激光掃描共聚焦顯微鏡測定人參皂甙Rg1影響前后的細胞

3、內游離鈣離子濃度隨時間變化情況。 5、選用100只體重160-200g Wistar大白鼠，隨機分成10組，每組10只。A組：正常對照組，于實驗開始(0周)時處死。B-E組：人參皂甙Rg1治療組。F-J組：牙周炎對照組。B-E組分別于牙周炎模型建立并給藥后第1、2、3、4周處死，每次一組。F-J組分別于牙周炎模型建立后第0、1、2、3、4周處死，每次一組。切取大鼠上頜磨牙牙周組織標本作切片，免疫組織化學方法對IL-6、BGP進行

4、染色，光鏡觀察，測量灰度值，進行統(tǒng)計學分析。 結果： 1、玻片覆蓋法可顯著提高人牙周膜細胞原代培養(yǎng)的成功率。 2、人參皂甙Rg1對牙周膜細胞生長增殖的影響 與對照組相比人參皂甙Rg10.005/μmol/L，0.01/μmol/L，0.05/μmol/L，0.1/μmol/L，1/μmol/L組均能明顯促進細胞增殖(P<0.05)，且在0.01-0.05/μmol/L濃度范圍內作用時間最長。 3、

5、人參皂甙Rg1對牙周膜細胞蛋白含量的影響 與對照組相比人參皂甙Rg10.01μmol/L，0.05μmol/L，0.1μmol/L組72小時細胞培養(yǎng)液中蛋白含量均明顯高于對照組(P<0.05)。 4、人參皂甙Rg1對牙周膜細胞ALP活性的影響： 與對照組相比人參皂甙Rg10.01μmol/L，0.05μmol/L，0.1μmol/L組72小時細胞培養(yǎng)液中ALP活性均明顯高于對照組(P<0.05)。 5、人

6、參皂甙Rg1對牙周膜細胞內游離鈣離子濃度的影響： 人參皂甙Rg1(0.01μmol/L)使人牙周膜細胞內游離鈣離子降低，最后維持在比加藥前低的靜息鈣水平上。 6、人參皂甙Rg1對細胞周期的影響： FCM檢測顯示經0.01μmol/L人參皂甙Rg1作用48h后，牙周膜細胞G1期細胞降低(P<0.05)，S期細胞升高且細胞增殖指數(shù)PrI值(S+G2/M)％顯著增高(P<0.05)。 7、大鼠實驗性牙周炎動物

7、模型的成功建立： 動物采用牙間結扎加激素注射第4天后便出現(xiàn)了進食減少、倦怠少動等表現(xiàn)，符合中醫(yī)腎虛的癥狀，并且出現(xiàn)了牙槽骨疏松、牙槽嵴吸收、牙周袋形成等病理性改變。正常組大鼠則無上述表觀。牙周炎組牙周組織中BGP表達明顯低于正常組，IL-6表達明顯高于正常組(P<0.05)。 8、人參皂甙Rg1對大鼠牙周組織中有關細胞因子表達的影響： 從治療第二周起，治療組較牙周炎對照組牙周組織中的BGP水平明顯升高(P<0.0

8、5)；治療第三周起，治療組較對照組牙周組織中的IL-6水平顯著降低(P<0.05)，經治療后的實驗動物全身狀況也顯著改善。 結論： 玻片覆蓋法可顯著提高人牙周膜細胞原代培養(yǎng)的成功率。人參皂甙Rg1在一定濃度范圍內能提高牙周膜細胞的增殖活性、蛋白合成及堿性磷酸酶活性。人參皂甙Rg1使牙周膜細胞G1期細胞減少，S期細胞增加，細胞增殖指數(shù)PrI值(S+G2/M)％增高，促進更多的細胞進人增殖狀態(tài)，且人參皂甙Rg1可能通過改變細

9、胞內游離鈣離子的濃度，達到其促進細胞增殖的作用。牙間結扎加糖皮質激素注射的方法可成功地建立近似于人類臨床牙周炎的動物模型，為下一步研究中藥防治牙周炎提供了很好的實驗基礎。大鼠實驗性牙周炎模型牙周組織中IL-6含量較正常對照組明顯升高，BGP含量較正常對照組明顯降低，應用人參皂甙Rg1能顯著抑制實驗性牙周炎模型牙周組織中IL-6的表達，同時升高BGP的含量。根據(jù)上述結果證實人參皂甙Rg1可促進創(chuàng)傷愈合和組織再生，具有治療牙周炎并改善全身狀