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文檔簡介
1、隨著我國人口老齡化趨勢的加深,前列腺類疾病日益凸顯,嚴重影響中老年人的生活質量,其中良性前列腺增生(BPH)與前列腺癌(PCa)危害甚深.文獻研究表明,人體內的睪酮(T)可在5α-還原酶的催化作用下依賴還原性輔酶Ⅱ(NADPH)提供氫離子轉化為具有更強生物活性的二氫睪酮(DHT).DHT在體內的積聚與BPH的產生有著直接聯系.在PCa發(fā)病初期,阻斷雄性激素往往可以使癥狀得以緩解,但最終腫瘤細胞會朝非雄性激素依賴性轉化,導致治療失效.
2、 采用系統(tǒng)溶劑提取車前子、熟地黃、澤瀉、川牛膝等中藥材,并用硅膠柱層析初步分離提取物,建立了用于篩選5α-原酶抑制劑與DUl45細胞生長抑制劑的天然藥物初步分離提取庫. 對比吸光度檢測與熒光檢測NADPH的準確度與精確度,選擇熒光法建立5α-還原酶抑制劑的體外篩選模型,最終條件為:激發(fā)波長360 nm,發(fā)射波長465 nm,NADPH 40μM,T 20μM,5α-還原酶提取物5 mg/ml,提取物濃度100μg/ml,非那
3、雄胺(陽性對照)21μM,總體積120μl,37℃反應10 min.經過篩選發(fā)現:車前子、熟地黃、澤瀉、川牛膝均存在某些對50α-原酶有一定的抑制作用的提取部位,其中以澤瀉的正丁醇提取部位抑制活性最強. 通過應用四噻唑藍(MTT)比色法,對人體前列腺非雄性激素依賴性腫瘤細胞株DUl45進行了生長抑制劑的篩選.實驗結果表明,車前子正丁醇提取物經硅膠柱層析所得到的第二段收集物中所含物質對DUl45細胞生長具有很強的抑制活性,其IC<
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