HMG-CoA還原酶抑制劑對大鼠胰島β細胞功能的抑制作用及機制研究.pdf

1、第一部分大鼠胰島分離技術(shù)的建立 目的:探討影響胰島活性的因素，建立穩(wěn)定有效的大鼠胰島分離方法。 方法:通過膽管注射膠原酶方法提取大鼠胰島，通過葡萄糖刺激的胰島素分泌實驗(37℃水浴法)觀察提取的大鼠胰島的活性，比較分離純化過程中不同實驗條件對胰島活性的影響，胰島素測定采用放免法(RIA)。 結(jié)果:新鮮分離的大鼠胰島，25mmol/L葡萄糖刺激的胰島素分泌(1.6±0.23ng/islet/30min)約為2.8m

2、mol/L葡萄糖刺激的6倍(0.28±0.05ng/islet/30min)，BSA能明顯提高葡萄糖刺激的胰島素分泌水平，長時間培養(yǎng)(＞7d)的胰島，其葡萄糖刺激的胰島素分泌下降約25％，而新鮮分離的胰島和經(jīng)1～5d培養(yǎng)的胰島未見明顯差異。RPMI1640培養(yǎng)液中葡萄糖濃度11.1mmol/L組，其胰島素分泌明顯高于5.5mmol/L和25mmol/L兩組。 結(jié)論:分離的大鼠胰島具有生物學活性，BSA、RPMI1640培養(yǎng)液中葡

3、萄糖濃度及培養(yǎng)時間均與分離胰島活性有關(guān)。 第二部分HMG-CoA還原酶抑制劑對大鼠胰島β細胞胰島素分泌的影響及機制研究 目的:觀察HMG-CoA還原酶抑制劑對大鼠胰島β細胞葡萄糖刺激的胰島素分泌的影響，并分析其機制。 方法:以新鮮分離或經(jīng)24小時培養(yǎng)的大鼠胰島為實驗對象，通過葡萄糖刺激的胰島素分泌實驗(37℃水浴法)，1)觀察100μmol/L普伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀和阿托伐他汀對大鼠胰島β細胞ATP含量的影

4、響；2)觀察100μmol/L普伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀和阿托伐他汀對大鼠胰島β細胞葡萄糖刺激的胰島素分泌的影響；3)觀察普伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀和阿托伐他汀對大鼠胰島β細胞葡萄糖刺激的胰島素分泌影響的量效關(guān)系；4)觀察氟伐他汀、辛伐他汀和阿托伐他汀對葡萄糖刺激的胰島素分泌的抑制作用經(jīng)24小時清洗后的恢復；胰島素測定采用用放免法(RIA)。 結(jié)果:1)100μmol/L辛伐他汀和阿托伐他汀無論是短時間作用(37℃水浴30分

5、鐘)，還是長時間作用(24小時培養(yǎng))明顯抑制胰島β細胞ATP含量，抑制葡萄糖刺激的胰島素分泌(P＜0.05)；2)經(jīng)他汀類藥物24小時培養(yǎng)后，100μmol/L氟伐他汀能明顯抑制胰島β細胞ATP含量，抑制葡萄糖刺激的胰島素分泌(P＜0.05)；3)普伐他汀無論是短時間還是較長時間作用，均未見對ATP和胰島素分泌的這種抑制作用；4)辛伐他汀在30μmol/L、阿托伐他汀在100μmol/L，呈劑量依賴性抑制葡萄糖刺激的胰島素分泌；5)他汀

6、類藥物對ATP和胰島素的抑制作用與其脂溶性有關(guān)。 結(jié)論:1)高濃度脂溶性辛伐他汀、阿托伐他汀、氟伐他汀通過抑制胰島β細胞ATP的生成、抑制ATP敏感鉀通道(KATP)而抑制葡萄糖刺激的胰島素分泌；2)他汀類藥物對胰島素分泌功能的抑制作用呈劑量依賴性；3)對于高齡及肝腎功能不全的患者，長期應用可能導致藥物蓄積，應注意其對胰島β細胞胰島素分泌的潛在抑制作用。 第三部分HMG-CoA還原酶抑制劑對大鼠胰島β細胞胰島素合成的影響

7、及機制研究 目的:觀察HMG-CoA還原酶抑制劑對大鼠胰島β細胞胰島素合成的影響，并分析其作用機制。 方法:1)RIA法測定經(jīng)24小時培養(yǎng)后，100μmol/L普伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀和阿托伐他汀對大鼠胰島β細胞胰島素含量的影響；2)SYBERGreenⅠ熒光定量PCR分析100μmol/L普伐他汀、氟伐他汀、辛伐他汀和阿托伐他汀對大鼠胰島β細胞胰島素mRNA表達的影響；3)將人胰島素-熒光素酶基因(humanins

8、ulinpromoter-LuciferaseVector)和內(nèi)控基因(phRL-TKVector)共轉(zhuǎn)染MIN6細胞，雙熒光素酶法分析他汀類藥物對胰島素啟動子活性的影響。 結(jié)果:1)經(jīng)24小時培養(yǎng)后，100μmol/L脂溶性的氟伐他汀、辛伐他汀和阿托伐他汀使大鼠胰島β細胞胰島素含量明顯減少(P＜0.05)；2)經(jīng)24小時培養(yǎng)后，100μmol/L氟伐他汀、辛伐他汀和阿托伐他汀明顯抑制大鼠胰島β細胞胰島素mRNA表達(P＜0.0