豆粕適度酶解研究.pdf

1、豆粕(DSF)適度酶解旨在使其產(chǎn)品組成符合動(dòng)物營養(yǎng)學(xué)模型，現(xiàn)有的評(píng)判體系不能滿足這方面研究需要。本課題建立了豆粕水解程度、平均分子量、酶解液中鉬形態(tài)分布和植酸磷釋放率四種分析方法，應(yīng)用于適度酶解研究，得到兼具營養(yǎng)性和功能性的豆粕酶解液。蛋白質(zhì)測(cè)定方法主要有考馬斯亮藍(lán)法(CBB G-250)、紫外吸收法(UV)和凱氏定氮法。研究表明酶解液中蛋白成分，因豆粕來源和所處水解階段不同，分子結(jié)構(gòu)中堿性基團(tuán)或芳環(huán)氨基酸殘基暴露程度存在顯著差異，使C

2、BB G-250和UV法難以測(cè)定酶解液中蛋白的準(zhǔn)確含量，而凱氏定氮法不受上述因素影響，呈現(xiàn)出很好的精密度和準(zhǔn)確性。酶解液中氨基類化合物的平均分子量更能了解大豆蛋白的實(shí)際水解程度，由于茚三酮法測(cè)定的主要對(duì)象是α-氨基酸，以單一氨基酸為標(biāo)準(zhǔn)定量酶解液中氨基端數(shù)量欠妥；甲醛滴定法測(cè)定的是肽和氨基酸中氨基含量之和，結(jié)合pH計(jì)控制滴定終點(diǎn)，克服了樣品顏色帶來的誤差，使相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于2.5％。鉬是動(dòng)物必需的微量元素，其含量與形態(tài)直接影響動(dòng)物對(duì)它的

3、吸收，基于新試劑p-甲基偶氮水楊基熒光酮與鉬(Ⅵ)的顯色反應(yīng)，建立一種新的鉬形態(tài)分布的光度分析方法。鉬配合物的表觀摩爾吸光系數(shù)為1.54×10<'5>L.mol<'-1>·cm<'-1>，反應(yīng)具有很高的靈敏度和選擇性；酶解液A經(jīng)等電點(diǎn)沉淀除去未水解蛋白后得溶液B，溶液B經(jīng)D301R樹脂吸附后，依次用25mL pH3.6HAc-NaAc和80mL pH 9 NH<,4>Cl-HN<,3>·H<,2>O緩沖溶液洗脫得溶液C和D，分別用光度法

4、測(cè)定溶液B、C、D中水解鉬、結(jié)合態(tài)鉬(多肽和氨基酸螯合態(tài)鉬)和游離鉬的含量，實(shí)現(xiàn)鉬的形態(tài)分布研究。植酸酶可以將動(dòng)物不能利用的植酸磷轉(zhuǎn)化為無機(jī)磷，孔雀綠-鉬酸銨在聚乙烯醇增敏下，在酸性介質(zhì)中與磷酸根生成綠色締合物，在635 nm處有最大吸收，表觀摩爾吸光系數(shù)為9.30×10<'4>L．mol<'1>．cm<'-1>，方法選擇性好，測(cè)得DSF中含磷0.87％，其中植酸磷占62.13％，將方法應(yīng)用于植酸酶的作用條件優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)在pH4.5，45

5、℃下添加0.67％植酸酶作用45min可以達(dá)到較高的磷釋放率。 本文將整個(gè)酶解過程分解成豆粕預(yù)處理、蛋白酶解和植酸酶與蛋白酶的協(xié)同性三個(gè)方面加以研究。選擇pH3、40℃浸泡2h后沸水浴1.5min，再加入α-淀粉酶于pH6、40℃環(huán)境下作用30min進(jìn)行預(yù)處理，可使水解度提高35％。在單酶法、雙酶法和三酶法酶解DSF工藝中，三酶復(fù)合法效果最好。由于植酸酶于酸浸階段加入對(duì)蛋白酶的水解無抑制作用，從水解液的營養(yǎng)性和工藝的簡化出發(fā)，最