人胸腺瘤細(xì)胞系Thy0517的生物學(xué)特征.pdf

1、胸腺瘤(thymoma)是前縱隔最常見的原發(fā)性腫瘤，起源于胸腺上皮細(xì)胞，生長(zhǎng)較緩慢，其發(fā)病率約占成人縱隔腫瘤的20％，占前縱隔腫瘤的50％，人群的總發(fā)病率為0.15/100，000，其病因?qū)W尚不十分明確，且生物學(xué)行為復(fù)雜。深入研究胸腺瘤，揭示其發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制將不僅為胸腺瘤的早期診斷提供特異性生物學(xué)標(biāo)志，亦將為治療開辟新的途徑，最終達(dá)到提高胸腺瘤病人生存率的目的。
　　深入研究胸腺瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制不能直接在人

2、體內(nèi)進(jìn)行，而胸腺瘤細(xì)胞系是胸腺瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移分子機(jī)制研究的重要實(shí)驗(yàn)材料，其應(yīng)用使離體研究胸腺瘤細(xì)胞的特征、解析癌變機(jī)制成為可能，因此我們需要對(duì)已建立的胸腺瘤細(xì)胞系進(jìn)行其特性研究，為進(jìn)一步研究胸腺瘤發(fā)病機(jī)制提供良好的實(shí)驗(yàn)材料。
　　目的
　　通過實(shí)驗(yàn)研究，分析已建立的人胸腺瘤細(xì)胞系Thy0517的生物學(xué)特性，為胸腺瘤的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制和新的臨床治療途徑研究提供良好的實(shí)驗(yàn)材料。
　　方法
　　手術(shù)切除患者胸腺及胸腺瘤組織

3、，從切除的胸腺瘤中取腫瘤組織采用組織塊貼壁法進(jìn)行培養(yǎng);采用機(jī)械刮除和酶消化兩種方法進(jìn)行上皮細(xì)胞的純化;分離瘤細(xì)胞進(jìn)行體外細(xì)胞培養(yǎng);胰酶消化法傳代培養(yǎng)細(xì)胞;采用慢凍和快融方法進(jìn)行細(xì)胞的凍存與復(fù)蘇;相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué);采用細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn);裸鼠皮下接種培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞懸液觀察裸鼠致瘤情況;免疫組化法測(cè)定細(xì)胞系分子標(biāo)志物(CK7、CK8、CK19、EGFR、EMA、CD20、CD99、TdT、Ki67、P63)的表達(dá)情況及常規(guī)制

4、備染色體標(biāo)本分析核型。
　　結(jié)果
　　經(jīng)組織塊貼壁法體外培養(yǎng)，機(jī)械刮除和酶消化法純化獲得了胸腺瘤原代細(xì)胞，已在體外持續(xù)培養(yǎng)1年，傳至120代，傳代時(shí)間為2-3天，培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)良好;細(xì)胞呈多角形，細(xì)胞核大，核漿比例倒置，核仁清晰，核仁增大增多，可見巨核、雙核或多核細(xì)胞;細(xì)胞呈鋪路石樣生長(zhǎng)，長(zhǎng)滿瓶底后有重疊和堆積生長(zhǎng)現(xiàn)象，無接觸抑制;細(xì)胞生長(zhǎng)經(jīng)過潛伏期、對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期及平臺(tái)期，群體倍增時(shí)間為37小時(shí);細(xì)胞經(jīng)反復(fù)慢凍和快融的凍存與復(fù)蘇

5、后生長(zhǎng)穩(wěn)定，凍存復(fù)蘇后的細(xì)胞存活率為82％;染色體核型分析示細(xì)胞染色體數(shù)目分布在27至138條之間，染色體眾數(shù)為65-70，占80％，主干系為亞三倍體，結(jié)構(gòu)為人類腫瘤染色體的特點(diǎn)，染色體結(jié)構(gòu)及數(shù)量均異常，呈現(xiàn)腫瘤細(xì)胞特性;免疫組化實(shí)驗(yàn)示:細(xì)胞系分子標(biāo)志物(CK7、CK8、CK19、EGFR、EMA、Ki67、P63)呈陽(yáng)性表達(dá)，分子標(biāo)志物(CD20、CD99、TdT)呈陰性表達(dá);裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)后第14天可見腫瘤生長(zhǎng)，第85天，腫瘤長(zhǎng)徑約