骨髓增生異常綜合征造血細(xì)胞凋亡特征及藥物誘導(dǎo)的惡性克隆細(xì)胞系生物學(xué)變化.pdf

1、目的：探討骨髓增生異常綜合征(MDS)造血細(xì)胞凋亡特征及相關(guān)藥物對MDS-L原始細(xì)胞系的調(diào)控作用。 方法：1，用免疫組織化學(xué)方法(堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶系統(tǒng)，APAAP)結(jié)合DNA末端原位標(biāo)記(ISEL)同步檢測30例MDS病人骨髓切片標(biāo)本中CD68+或CD41陽性細(xì)胞及凋亡細(xì)胞，并分析二者間關(guān)系，缺鐵性貧血病例做對照。2，結(jié)合ISEL/流式細(xì)胞儀(FCM)和熒光原位雜交(FISH)共檢測19例MDS病例凋亡信號和克隆標(biāo)記，以

2、判斷凋亡細(xì)胞的克隆性來源；3，不同濃度不同時間的三氧化二砷(As2O3)和/或腫瘤壞死因子相關(guān)的凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)作用于MDS髓系原始細(xì)胞系MDS-L，然后用流式細(xì)胞儀AnnexinV熒光標(biāo)記檢測細(xì)胞凋亡。半固體培養(yǎng)18天后收獲細(xì)胞行形態(tài)學(xué)分類和分化抗原檢測。甲基化特異性PCR(Msp)檢測抑癌基因P15ink4b甲基化程度、RT-PCR檢測P15ink4bA水平表達(dá)，免疫標(biāo)記檢測P15ink4b蛋白水平表達(dá)。結(jié)果：1，MDS病

3、例骨髓中有核細(xì)胞凋亡明顯多于對照組；MDS之巨核細(xì)胞和微小巨核細(xì)胞(CD41陽性細(xì)胞)較對照組明顯增高，P分別為＜0.05和＜0.01。并呈現(xiàn)異常分布及成簇現(xiàn)象。巨核系凋亡無明顯增加。巨核系凋亡僅見于微小巨核細(xì)胞；MDS骨髓CD68陽性細(xì)胞數(shù)與造血細(xì)胞凋亡顯示顯著正相關(guān)；r=0.83，P＜0.001.MDS低危組(RA+RAS)CD68陽性細(xì)胞(巨噬細(xì)胞)和ISEL陽性細(xì)胞(凋亡細(xì)胞)數(shù)均高于高危組(RAEB+RAEB-t)(p分別＜0

4、.05和＜0.01)。2，10例經(jīng)ISEL/FISH分析的MDS患者骨髓有核細(xì)胞中異?？寺〖?xì)胞百分比平均為37.1﹪，凋亡細(xì)胞中異常克隆細(xì)胞百分比僅為24.0﹪。9例經(jīng)FCM/FISH分析者，8例顯示凋亡細(xì)胞中核型正常百分比高于非凋亡細(xì)胞中核型正常百分比。3，不同As2O3/TRAIL組合均可誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡，48h藥物處理時達(dá)高峰(約25﹪)，72h時仍有約9﹪的細(xì)胞凋亡。藥物處理(尤其是As2O3+TRAIL)導(dǎo)致細(xì)胞明顯的形態(tài)學(xué)分

5、化，而TRAIL能顯著降低CD34+細(xì)胞比率。未經(jīng)處理的MDS-L細(xì)胞基本不表達(dá)P1ink4b并伴有明顯的P15ink4bDNA甲基化。藥物處理后P15ink4b表達(dá)增強(qiáng)，并伴有DNA去甲基化；但免疫標(biāo)記未顯示蛋白水平P15ink4b表達(dá)的變化；結(jié)論：1,MDS存在造血細(xì)胞過度凋亡；外周血小板減少的原因可能與病態(tài)巨核細(xì)胞產(chǎn)生和釋放血小板障礙有關(guān)；MDS巨噬細(xì)胞與造血細(xì)胞凋亡的相關(guān)性提示腫瘤壞死因子(TNFα)參與凋亡誘導(dǎo)過程。2，MDS