細(xì)胞低氧培養(yǎng)系統(tǒng)的研制及人胸腺瘤細(xì)胞系的建立.pdf

1、腫瘤組織內(nèi)低氧是腫瘤生長(zhǎng)微環(huán)境的主要特征。雖然國(guó)外有成熟的低氧培養(yǎng)箱銷售，但由于價(jià)格昂貴，使其廣泛應(yīng)用受到限制，國(guó)內(nèi)一些研究人員也建立了很多低氧培養(yǎng)模型，但大多需要手工操作，且不能實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)培養(yǎng)艙內(nèi)氧濃度的變化。因此我們利用單片機(jī)技術(shù)，開(kāi)發(fā)細(xì)胞低氧培養(yǎng)系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)對(duì)培養(yǎng)系統(tǒng)的氧濃度實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)及嚴(yán)格控制，為細(xì)胞低氧的研究提供了穩(wěn)定的系統(tǒng)。應(yīng)用PIC16F877單片機(jī)作為控制器，通過(guò)單片機(jī)內(nèi)置AD模塊利用逐次逼近法計(jì)算輸入的模擬量，并將相應(yīng)電平信

2、號(hào)發(fā)送到繼電器，換成標(biāo)準(zhǔn)電壓后控制氧氣和氮?dú)怃撈康碾姶砰y開(kāi)閉，維持培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)恒定的氧濃度。通過(guò)單片機(jī)的控制，建立的低氧培養(yǎng)系統(tǒng)可獲得0％～95%任意氧濃度，可滿足細(xì)胞對(duì)不同低氧濃度實(shí)驗(yàn)的要求。
　　本研究利用此低氧培養(yǎng)系統(tǒng)，檢測(cè)了胸腺瘤細(xì)胞系在低氧狀態(tài)下的部分指標(biāo)。目前，國(guó)內(nèi)外胸腺瘤伴重癥肌無(wú)力患者的胸腺瘤細(xì)胞系還未見(jiàn)報(bào)道，為此，我們從胸腺瘤伴重癥肌無(wú)力手術(shù)患者中，取胸腺瘤組織進(jìn)行原代培養(yǎng)，探討人胸腺瘤組織原代培養(yǎng)的方法，明確胸腺

3、瘤組織和胸腺瘤細(xì)胞系在體外生長(zhǎng)的最佳條件和最適培養(yǎng)基。原代培養(yǎng)成功后，通過(guò)各種方法純化和穩(wěn)定傳代建立一株人胸腺瘤細(xì)胞系，命名為T(mén)hy0517，為胸腺瘤發(fā)病的分子基礎(chǔ)及胸腺瘤與重癥肌無(wú)力的信號(hào)傳導(dǎo)關(guān)系的研究提供了穩(wěn)定的細(xì)胞模型。應(yīng)用免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定細(xì)胞系來(lái)源，倒置顯微鏡觀察此細(xì)胞系的生長(zhǎng)特征，測(cè)定細(xì)胞倍增時(shí)間，HE染色觀察細(xì)胞內(nèi)微細(xì)結(jié)構(gòu)，秋水仙素法獲得細(xì)胞系染色體眾數(shù)及分布，分析體外裸鼠致瘤能力，并應(yīng)用低氧培養(yǎng)系統(tǒng)檢測(cè)細(xì)