環(huán)巴胺的提取分離及其制備.pdf

1、藜蘆(Veratrum Linn.)是百合科(Liliaceae)植物,世界上大約有40多種,分布于亞、歐、北美洲。藜蘆有多種藥用功效,近年來發(fā)現(xiàn)藜蘆屬植物中含有的環(huán)巴胺對多種腫瘤都有良好的抑制作用,因此,環(huán)巴胺作為一種新型的抗癌藥物在全球引起了高度重視。我國盛產(chǎn)藜蘆,但是對于藜蘆中環(huán)巴胺的提取分離工藝研究極少,阻礙了我國對新型抗癌藥物的研究。
　　本文主要研究了環(huán)巴胺的提取純化及其制備,首先找出了合適的提取生物質(zhì),找出了合適的環(huán)

2、巴胺檢測條件,再對環(huán)巴胺的提取進(jìn)行單因素實驗、響應(yīng)面實驗的提取優(yōu)化,然后進(jìn)行單因素和正交實驗對提取得到的環(huán)巴胺粗品進(jìn)行柱層析分離純化的工藝進(jìn)一步優(yōu)化,得到純品環(huán)巴胺的同時得到環(huán)巴胺的制備原料介芬胺。最后,利用經(jīng)典的黃鳴龍反應(yīng)由介芬胺合成制備環(huán)巴胺。本研究創(chuàng)新在于高效利用了藜蘆原料,提取分離的工藝優(yōu)化與制備相結(jié)合,提高了環(huán)巴胺的產(chǎn)率,主要研究內(nèi)容及得到的相關(guān)結(jié)論如下:
　　(1)探索得到了較好的環(huán)巴胺檢測條件:WATO-54275

3、C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流動相:0.01％三氟乙酸(A)和乙腈(B);分析時長:25min;流速:1.0mlL/min;檢測波長:215nm;柱溫:25℃;梯度洗脫:0-12min:90%-70%(A);12-18min:70%-70%(A);18-23min:70%-35%(A);23-30min:35%-35%(A)。
　　(2)在四種常用藥用藜蘆中找到了合適的環(huán)巴胺提取生物質(zhì):發(fā)現(xiàn)在毛葉藜蘆中含有豐富的環(huán)

4、巴胺,通過高效液相色譜檢測環(huán)巴胺標(biāo)準(zhǔn)品繪制環(huán)巴胺標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到毛葉藜蘆中環(huán)巴胺的含量約為0.076%。
　　(3)采用響應(yīng)面法優(yōu)化了從毛葉藜蘆中提取環(huán)巴胺的條件:在單因素實驗的基礎(chǔ)上選取提取液料比,提取時間和提取溫度為隨機因子,探究對環(huán)巴胺的提取的影響,各因素對環(huán)巴胺提取率的影響程度大小依次為:提取液料比 A(p<0.0001,極顯著)>提取時間 B(p=0.0009,極顯著)>提取溫度(p=0.0035,極顯著)。并確定了最佳

5、的提取工藝參數(shù)為:提取液料比9:1(mL/g),提取時間10.0h,提取溫度48.0℃。
　　(4)在單因素實驗的基礎(chǔ)上設(shè)計正交實驗,優(yōu)化了環(huán)巴胺柱層析純化條件:以洗脫劑的比例、上樣量、流速以及上柱硅膠量為隨機因子,進(jìn)行正交實驗,得出因為當(dāng)洗脫劑己烷:丙酮=65:35,上柱硅膠量為80g,上樣量為12g,流速控制在6mL/min下進(jìn)行洗脫時,得到的環(huán)巴胺的純度最高同時收率也是最高,分別為94.4%和74.2%。再對純度較高的環(huán)巴胺

6、重結(jié)晶繼續(xù)純化,得到97.2%的高純品環(huán)巴胺。
　　(5)通過柱層析分離純化得到了介芬胺的純品:在柱層析分離純化過程中,收集分離組份,通過質(zhì)譜與核磁確定了介芬胺,并得到了介芬胺純品。
　　(6)在單因素實驗的基礎(chǔ)上設(shè)計正交實驗,得到了介芬胺制備環(huán)巴胺的優(yōu)化條件:以反應(yīng)時間、反應(yīng)溫度、原料摩爾比、催化劑的量為隨機因子進(jìn)行正交實驗?？疾鞂榉野分苽洵h(huán)巴胺收率的影響。得出在使用二乙二醇為反應(yīng)溶劑、聚乙二醇400為反應(yīng)催化劑、反應(yīng)溫