環(huán)巴胺(Cyclopamine)聯(lián)合奧沙利鉑抑制胃癌細胞生長的研究.pdf

1、目的:(1)研究Hedgehog信號傳導通路在正常胃上皮細胞和胃癌細胞中的表達情況。(2)研究Hedgehog信號傳導通路特異性抑制劑環(huán)巴胺(Cyclopamine)與奧沙利鉑單藥和聯(lián)合用藥對胃癌細胞增殖、細胞周期以及Hedgehog信號傳導通路的影響。
　　方法:(1)采用RT-PCR方法檢測了胃永生化上皮細胞GES.1和胃癌細胞BGC-823、SGC-7901和MKN-45中Hedgehog信號傳導通路各信號分子的表達水平;(

2、2)采用免疫細胞化學方法檢測了MKN45細胞GLI蛋白的表達;(3)采用CCK-8法檢測了不同濃度環(huán)巴胺和奧沙利鉑單藥和聯(lián)合用藥對MKN-45細胞增殖的影響;觀察聯(lián)合環(huán)巴胺是否可以提高奧沙利鉑抑制細胞增殖的作用(4)采用流式細胞儀檢測了環(huán)巴胺和奧沙利鉑對MKN-45細胞凋亡和周期分布的影響;(5)采用Western-blotting檢測了環(huán)巴胺和奧沙利鉑對Hedgehog信號通路蛋白SHH、GLI1表達的影響。
　　結(jié)果:(1)經(jīng)

3、半定量PCR檢測發(fā)現(xiàn)在胃永生化細胞GES-1和胃癌細胞BGC-823、SGC-7901和MKN-45中都存在Hedgehog信號傳導通路的表達。PTCH和SHH在所有細胞中表達均上調(diào),GLI在GES-1和SGC-7901中未見表達。(2)GLI在MKN-45細胞存在表達,定位于胞核和胞漿。(3)不同濃度的環(huán)巴胺和奧沙利鉑對胃癌細胞株MKN-45作用24小時、36小時、48小時后,均顯示出明顯的細胞增殖抑制作用,并呈濃度和時間依賴性;而在

4、GES-1細胞中未觀察到環(huán)巴胺對細胞的生長抑制作用;環(huán)巴胺和奧沙利鉑聯(lián)合用藥較單藥能更有效抑制細胞增殖(P<0.05)。當15uM環(huán)巴胺聯(lián)合10ug/ml奧沙利鉑時,細胞生長抑制率超過15uM環(huán)巴胺和15ug/ml奧沙利鉑單藥的抑制率。(4)環(huán)巴胺和奧沙利鉑單藥均可誘導細胞凋亡,并呈濃度和時間依賴性。兩藥聯(lián)用后,MKN-45細胞凋亡比例較單藥明顯增加(P<0.05)。隨環(huán)巴胺藥物濃度的逐漸遞增,MKN45細胞G0/G1期比例逐漸增加,S

5、期比例逐漸降低;奧沙利鉑也可增加G0/G1期比例,降低S期比例;兩藥聯(lián)合作用后,MKN-45細胞G0/G1期和G2/M期比例較單藥增加更高,S期明顯降低(P<0.001)。(5)Western-blotting顯示:環(huán)巴胺可以下調(diào)MKN-45細胞Hedgehog信號通路中的SHH和GLI蛋白的表達,奧沙利鉑單藥對SHH和GLI的表達無明顯影響。
　　結(jié)論:(1)正常胃上皮細胞GES-1中存在Hedgehog信號通路,但不表達下游轉(zhuǎn)

6、錄因子GLI,而胃癌細胞株MKN-45和BGC-823中存在Hedgehog信號通路的激活,SGC-7901細胞的生長可能不依靠Hedgehog信號通路的激活。(2)GLI表達于MKN-45細胞胞漿和胞核中。(3)環(huán)巴胺和奧沙利鉑單藥和聯(lián)合用藥均可抑制胃癌MKN-45細胞株的增殖,兩藥聯(lián)用較單藥作用更明顯。(4)環(huán)巴胺和奧沙利鉑均可誘導MKN-45細胞凋亡,使S期DNA合成降低,兩藥聯(lián)用較單藥作用更明顯。提示環(huán)巴胺可提高奧沙利鉑對胃癌細