蛇足石杉中石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙的分離純化研究.pdf

1、石衫堿甲(Huperzine A，HupA)是草藥蛇足石杉中存在的天然生物堿，是一種強(qiáng)效、可逆性的乙酰膽堿酯酶抑制劑(AChE inhibitor)，可以用于治療阿爾茨海默氏病(Alzheimer's disease，AD)和其他記憶障礙病癥，因此成為研究人員關(guān)注的熱點(diǎn)。與石杉?jí)A甲結(jié)構(gòu)相似的石杉?jí)A乙(Huperzine B，HupB)也具有一定的乙酰膽堿酯酶抑制活性，天然石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙及以其骨架來合成的類似物被大量用于藥理、藥效和臨

2、床研究。然而，石杉?jí)A甲和石杉?jí)A乙在石杉科植物中含量很低，藥源植物資源的匱乏已成為發(fā)展新型藥物的瓶頸?？茖W(xué)利用有限的植物資源非常重要，為此本研究目的是開發(fā)一種快速和低成本的HupA和HupB分離純化工藝，對(duì)不同提取和純化的方法進(jìn)行比較，建立一套精確的檢測和分離方法，并對(duì)其中關(guān)鍵的改性劑進(jìn)行了研究，最后對(duì)反相制備色譜分離進(jìn)行了優(yōu)化。此外，本研究還進(jìn)行了對(duì)蛇足石杉內(nèi)生真菌的篩選和初步活性研究。
　　 1、確定了高效液相色譜檢測HupA

3、和HupB的流動(dòng)楣條件:0.1％TFA，18％甲醇，1mL/min,該方法快速、準(zhǔn)確，證實(shí)了不同產(chǎn)地蛇足石衫中的含量差異。研究發(fā)現(xiàn)添加改性劑可以有效改善HupA和HupB的分離，減少拖尾，酸改性劑對(duì)流動(dòng)相pH的調(diào)節(jié)作用對(duì)保留時(shí)間和分離度有很大影響，三氟乙酸(TFA)是最佳的酸改性劑。
　　 2、比較了傳統(tǒng)浸提、超聲提取和閃式提取法提取HupA和HupB的效果，初步純化用樹脂法和萃取法的差別。超聲提取得率可達(dá)75％，操作簡單易放大

4、，更加適合工業(yè)生產(chǎn);較之于其他樹脂，弱極性大孔樹脂SP850吸附解吸效果最好，可以有效濃縮提取液100倍以上，HupA和HupB回收率都在90％以上。
　　 3、優(yōu)化了制備色譜分離HupA和HupB的進(jìn)樣量和流速，最佳條件:0.1％TFA，流速8mL/min，上樣量40mg，同時(shí)得到HupA和HupB純度均在98％以上，總回收率分別為83％和81.8％。
　　 4、從安徽黃山、福建三明的蛇足石杉植株中分離出52株內(nèi)生真菌