P2X3受體在大鼠膀胱出口部分梗阻ICCs中的表達(dá)及電生理學(xué)特性的研究.pdf

1、膀胱出口部分梗阻(Partialbladderoutletobstruction,PBOO)可引起膀胱結(jié)構(gòu)及功能的改變而導(dǎo)致膀胱過度活動(dòng)癥(Overactivebladder,OAB)。最近，卡哈爾間質(zhì)細(xì)胞(InterstitialCellsofCajal，ICCs)在OAB病理生理學(xué)中的作用越來越受到關(guān)注。這些間葉細(xì)胞樣的細(xì)胞最先在胃腸道中被發(fā)現(xiàn)，被命名為肌成纖維細(xì)胞，ICCs或間質(zhì)細(xì)胞(InterstitialCells，ICs)。

2、有研究表明，ICCs作為胃腸道慢波電流的起搏者和傳導(dǎo)者，在神經(jīng)肌肉信號傳遞中起重要的調(diào)節(jié)作用。組織學(xué)的證據(jù)顯示，膀胱中的ICCs呈星網(wǎng)狀分布且介于尿路上皮和神經(jīng)末端之間，提示他們之間可能存在直接的信號傳導(dǎo)。研究發(fā)現(xiàn)，ICCs在OAB患者中的數(shù)量明顯增多，抑制ICCs可以減少平滑肌的收縮活動(dòng)。另外，在PBOO中ICCs的超微結(jié)構(gòu)也發(fā)生了改變。
　　在1972年通過對豚鼠膀胱的研究發(fā)現(xiàn)，腺苷三磷酸(Adenosinetriphosph

3、ate,ATP)在膀胱的神經(jīng)傳遞中起重要的作用。膀胱充盈和傳入神經(jīng)之間存在信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，在膀胱上皮受到牽拉時(shí)可以導(dǎo)致ATP的釋放。研究證實(shí)，ATP受體亞型P2X3在膀胱中與初級神經(jīng)關(guān)聯(lián)十分密切，并在神經(jīng)傳導(dǎo)中起關(guān)鍵的作用。P2X3基因敲除小鼠在膀胱測壓中表現(xiàn)出膀胱反射減退并隨之產(chǎn)生膀胱充盈次數(shù)減少和膀胱容積增大。很多研究證實(shí)P2X3受體在膀胱的機(jī)械感覺傳導(dǎo)中起重要的作用，并參與排尿反射的過程，但很少有該受體在膀胱ICCs中的功能和表達(dá)的相關(guān)

4、報(bào)道。我們前期的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了膀胱上皮下的ICCs與傳出神經(jīng)之間有緊密的聯(lián)系，在膀胱上皮下的ICCs中有大量的P2X3受體表達(dá)。近期的一些研究也提示在膀胱過度活動(dòng)的患者中可能存在異常的P2X3受體介導(dǎo)的感覺信號。在本實(shí)驗(yàn)中，我們對P2X3受體在PBOO大鼠膀胱ICCs中的表達(dá)及功能進(jìn)行了研究，以期進(jìn)一步了解該受體與PBOO導(dǎo)致的膀胱功能障礙之間的關(guān)聯(lián)。
　　目的
　　探討不同時(shí)間點(diǎn)P2X3受體在PBOO大鼠膀胱ICCs中的表達(dá)及

5、電生理特性。
　　方法
　　1．48只雌性大鼠隨機(jī)分為四組：4，6，8周PBOO組及假手術(shù)對照組。利用膀胱內(nèi)壓測量法研究PBOO四周后大鼠膀胱功能變化。在4，6，8周后，處死大鼠收集膀胱標(biāo)本用于實(shí)驗(yàn)。
　　2．利用免疫熒光化學(xué)技術(shù)探究P2X3受體在膀胱ICCs中的表達(dá)。
　　3．應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)(ReverseTranscription-PCR，RT-PCR)檢測P2X3受體mRNA的表達(dá)水平。
　　4．用

6、電生理學(xué)方法觀察PBOO大鼠膀胱ICCs內(nèi)向電流的變化。
　　結(jié)果
　　1．膀胱測壓測量結(jié)果顯示，與對照組相比較，PBOO大鼠膀胱最大逼尿肌壓力明顯上升；殘余尿量顯著增加；膀胱充盈體積減?。话螂醉槕?yīng)性無明顯改變。
　　2．與對照組相比較，PBOO大鼠膀胱ICCs中P2X3受體表達(dá)明顯上調(diào)，呈時(shí)間依賴性。
　　3．RT-PCR提示在4，6，8周PBOO大鼠膀胱ICCs中的P2X3受體mRNA表達(dá)水平顯著升高。