中腦導(dǎo)水管周?chē)屹|(zhì)P2X3受體在電針鎮(zhèn)痛中的作用.pdf

1、疼痛對(duì)人類健康危害極大,因此對(duì)疼痛機(jī)制的探索一直是臨床醫(yī)學(xué)和神經(jīng)科學(xué)研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。慢性神經(jīng)痛繼發(fā)于外周或中樞神經(jīng)損傷,表現(xiàn)有自發(fā)痛(spontaneouspain),痛覺(jué)過(guò)敏(hyperalgesia)以及觸誘發(fā)痛(allodynia)等。細(xì)胞外的三磷酸腺苷(adenosine5'-triphosphate,ATP)通過(guò)與細(xì)胞膜上嘌呤受體(purinoceptors)結(jié)合,促進(jìn)疼痛在外周和中樞的傳遞,其中P2X3受體亞型是嘌呤受體中

2、一個(gè)主要傳遞疼痛信息的受體。中腦導(dǎo)水管周?chē)屹|(zhì)(midbrain periaqueductal gray,PAG)在疼痛信息傳遞中處于承上啟下的關(guān)鍵部位,是機(jī)體內(nèi)源性疼痛調(diào)制系統(tǒng)(endogenous pain modulatory system)的一個(gè)重要組成部分,高位中樞神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)疼痛信息的調(diào)制往往都通過(guò)對(duì)PAG功能的調(diào)節(jié)而實(shí)現(xiàn)。在東方國(guó)家,電針(electroacupunctum,EA)廣泛運(yùn)用于慢性疼痛的臨床治療已有2000多年

3、歷史,療效可靠,但是一直以來(lái)對(duì)電針鎮(zhèn)痛機(jī)理尚不明確,在一定程度上阻礙了電針治療的臨床運(yùn)用和推廣。
　　 目的:(1)觀察Sprague-Dawley(SD)大鼠在外周神經(jīng)慢性結(jié)扎性損傷(chronicconstriction iniury,CCI)手術(shù)所引發(fā)慢性神經(jīng)痛前后熱痛閾、機(jī)械痛閾的變化和中腦導(dǎo)水管周?chē)屹|(zhì)外側(cè)部(lateral midbrain periaqueductal gray,1PAG)中P2X3受體表達(dá)變化。(

4、2)通過(guò)在慢性神經(jīng)痛大鼠(以下稱:CCI大鼠)1PAG微量注射P2X3受體的激動(dòng)劑和特異性阻斷劑,觀察CCI大鼠熱痛閾和機(jī)械痛閾的改變。(3)對(duì)CCI大鼠進(jìn)行多次穴位電針治療,觀察電針治療前后,CCI大鼠熱痛閾和機(jī)械痛閾的改變以及1PAG中P2X3受體表達(dá)變化,探討1PAG中P2X3受體表達(dá)與電針鎮(zhèn)痛的關(guān)系,為臨床電針治療慢性神經(jīng)痛提供新的理論依據(jù)。
　　 方法:(1)建立SD大鼠慢性右側(cè)坐骨神經(jīng)結(jié)扎性損傷模型,通過(guò)輻射熱實(shí)驗(yàn)(

5、radiant heat test)和von Frey纖維絲實(shí)驗(yàn)(von Frey filaments test)檢測(cè)大鼠在神經(jīng)損傷前后,建模側(cè)后肢熱痛閾(thermal withdrawal latency,TWL)和機(jī)械痛閾(mechanicalwithdrawal threshold,MWT)的變化,通過(guò)免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察1PAG中P2X3受體表達(dá)的變化以及通過(guò)免疫印跡技術(shù)觀察1PAG中P2X3蛋白水平變化;(2)通過(guò)對(duì)CCI大

6、鼠中腦1PAG微量注射P2X3受體的特異性阻斷劑A-317491阻斷1PAG中P2X3受體功能后,在1PAG微量注射ATP的類似物α,β-亞甲基ATP(α,β-methylene-ATP,α,β-meATP),觀察CCI大鼠熱痛閾和機(jī)械痛閾變化規(guī)律;運(yùn)用腦片全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),觀察乳鼠IPAG神經(jīng)元的α,β-meATP誘發(fā)放電和A-317491對(duì)α,β-meATP誘發(fā)放電的影響;(3)在CCI大鼠建模側(cè)“足三里”和“三陰交”穴給予多次電針

7、刺激,觀察電針治療前后大鼠熱痛閾和機(jī)械痛閾以及1PAG中P2X3受體表達(dá)變化;(4)用針對(duì)P2X3基因的反義寡聚核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)腦內(nèi)微量注射降低1PAG中P2X3mRNA表達(dá)后,觀察對(duì)“足三里”穴位電針治療鎮(zhèn)痛作用的影響,以探討電針治療和1PAG中P2X3受體表達(dá)的關(guān)系。
　　 結(jié)果:(1)通過(guò)對(duì)SD大鼠疏松結(jié)扎右側(cè)坐骨神經(jīng)后成功復(fù)制出慢性神經(jīng)痛動(dòng)物模型,建模成功大鼠的熱痛閾和機(jī)械痛閾均

8、下降,CCI術(shù)后第14天熱痛閾和機(jī)械痛閾下降至最低值,14天后熱痛閾和機(jī)械痛閾均有小幅緩慢上升但與正常大鼠熱痛閾和機(jī)械痛閾比較差異仍有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)CCI大鼠中腦PAG中P2X3受體陽(yáng)性表達(dá)與正常大鼠以及假手術(shù)大鼠比較有輕度上調(diào),主要陽(yáng)性表達(dá)部位在1PAG,同時(shí)1PAG中P2X3受體蛋白水平與正常大鼠和假手術(shù)大鼠比較也有輕度升高。(3)在1PAG微量注射ATP類似物α,β-meATP后,與注射前比較,CCI大鼠熱痛閾和機(jī)械痛閾值有明

9、顯升高;當(dāng)用P2X3受體的特異性阻斷劑A-317491在IPAG微量注射進(jìn)行預(yù)處理后,α,β-meATP的痛閾升高效果明顯減弱,熱痛閾和機(jī)械痛閾值升高幅度減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)α,β-meATP可使乳鼠1PAG神經(jīng)元放電頻率增加,P2X3受體特異性阻斷劑A-317491可抑制此作用;(5)在CCI大鼠“足三里”和“三陰交”穴位給予多次電針刺激后,伴隨P2X3受體在CCI大鼠1PAG表達(dá)上調(diào),CCI大鼠痛閾明顯升高;相反,對(duì)CCI大鼠

10、進(jìn)行“非穴位”電針,P2X3受體在1PAG表達(dá)無(wú)明顯變化,CCI大鼠痛閾改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;(6)當(dāng)用針對(duì)P2X3基因的反義寡聚核苷酸1PAG微量注射降低P2X3受體在1PAG中表達(dá)后,“足三里”穴位電針對(duì)CCI大鼠的鎮(zhèn)痛效果明顯下降。
　　 結(jié)論:(1)外周神經(jīng)(坐骨神經(jīng))損傷可導(dǎo)致SD大鼠熱痛閾和機(jī)械痛閾值下降,CCI大鼠1PAG的P2X3陽(yáng)性表達(dá)上升;(2)1PAG微量注射α,β-meATP可引起CCI大鼠熱痛閾和機(jī)械痛閾值

11、的顯著性升高,此作用可因微量注射P2X3受體的特異性阻斷劑A-317491預(yù)處理而減弱;同時(shí)A-317491對(duì)1PAG神經(jīng)元α,β-meATP誘發(fā)電流有抑制作用。(3)對(duì)CCI大鼠“足三里”穴位給予7次電針刺激,可引起CCI大鼠熱痛閾和機(jī)械痛閾值的升高以及P2X3受體在1PAG表達(dá)的升高;對(duì)CCI大鼠“非穴位”進(jìn)行7次電針,不能引起痛閾升高和。P2X3受體在1PAG表達(dá)變化;(4)在1PAG多次微量注射針對(duì)P2X3基因的反義寡聚核苷酸后