電針對(duì)CCI大鼠P2X3受體及NT-3、IL-1β和膠質(zhì)細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:觀察電針(Electroacupuncture，EA)對(duì)慢性坐骨神經(jīng)擠壓性損傷(CCI)大鼠背根神經(jīng)節(jié)(DRG)及脊髓背角P2X3受體的影響;同時(shí)觀察對(duì)NT-3、IL-1β表達(dá)和脊髓膠質(zhì)細(xì)胞活化的影響。闡述電針治療神經(jīng)病理性疼痛可能存在的鎮(zhèn)痛機(jī)制及同側(cè)電針與對(duì)側(cè)電針的鎮(zhèn)痛區(qū)別。
　　方法:將120只痛閾相近(MWT:23.8±0.96 g，TWL:19.6±1.38 s)的雄性SD大鼠隨機(jī)分為假模組、CCI模型組、對(duì)側(cè)電針組

2、與同側(cè)電針組。各組大鼠于造模前及造模后3、5、7、10、12、14天分別測(cè)量造模側(cè)足MWT和TWL，電針組于造模后第7天給予電針治療“足三里”-“陽(yáng)陵泉”連續(xù)7d，每天一次，觀察造模前后及電針前后大鼠的痛閾變化。取各組中6只大鼠于第14天電針后急性分離DRG神經(jīng)元，應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)記錄DRG神經(jīng)元在加入1-1000nM A-317491后，加入100μM ATP所激發(fā)電流的大小情況，分析急性分離狀態(tài)下EA和A-317491對(duì)DRG神

3、經(jīng)元ATP激活電流的影響。取各組6只大鼠進(jìn)行鞘內(nèi)置管，造模12天后鞘內(nèi)給予30nMA-317491，其它處理同上，觀察記錄大鼠痛閾改變情況。另取各組8只大鼠于造模第14天，取L4-6背根神經(jīng)節(jié)及L4-L5脊髓節(jié)段進(jìn)行P2X3受體免疫熒光及WB實(shí)驗(yàn)，并檢測(cè)NT-3、IL-1β表達(dá)及脊髓膠質(zhì)細(xì)胞的活化情況。
　　結(jié)果:
　　1.CCI造模后大鼠機(jī)械痛閾及熱痛閾均較假模組降低，出現(xiàn)痛覺(jué)過(guò)敏現(xiàn)象(P＜0.01)，經(jīng)過(guò)7天的電針治療，

4、電針組大鼠痛閾較對(duì)照組明顯增加（P＜0.01）;而同側(cè)電針組和對(duì)側(cè)電針組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　2.大鼠DRG神經(jīng)元在受到100μ M的ATP激發(fā)后產(chǎn)生不同幅度的電流，CCI模型組電流幅度較假模組大（P＜0.01），與模型組相比電針組電流幅度明顯低（P＜0.01），而同側(cè)電針組與對(duì)側(cè)電針組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提前加入1、10、100、1000nM A-317491后再加入100μM的ATP觀察

5、電流變化情況，各組電流受抑制程度之間差異無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)（P＞0.05）。
　　3.在活體狀態(tài)下，鞘內(nèi)注射A-317491后觀察各組痛閾變化，統(tǒng)計(jì)A-317491和電針的交互作用，發(fā)現(xiàn)模型組與電針組MWT、TWL有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）。
　　4.比較各組大鼠DRG神經(jīng)元由100μM的ATP激發(fā)出電流數(shù)目及P2X3受體所介導(dǎo)的快電流所占比例，一方面發(fā)現(xiàn)CCI模型組激發(fā)電流數(shù)目較假模組明顯增加（P＜0.01），而電針治療降低了

6、激發(fā)電流數(shù)目（P＜0.01）;另一方面發(fā)現(xiàn)CCI對(duì)照組的快電流組成較假模組明顯增加（P＜0.01），而電針治療降低了快電流所占的比例（P＜0.01）。
　　5.免疫印跡及免疫熒光方法結(jié)果顯示:與假模組相比較，CCI造模后P2X3受體在DRG及脊髓背角表達(dá)均增加（P＜0.01），經(jīng)過(guò)7天的電針治療后P2X3受體的表達(dá)上調(diào)趨勢(shì)受到抑制（P＜0.01）;同側(cè)電針組與對(duì)側(cè)電針組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　6.大鼠NT

7、-3在DRG上的免疫熒光結(jié)果顯示:與假模組比較，CCI損傷后NT-3的表達(dá)上調(diào)（P＜0.05）。與模型組比較，電針治療后NT-3表達(dá)增高（P＜0.01）;而與對(duì)側(cè)電針組比較，同側(cè)電針組增加明顯(P＜0.05)。
　　7.大鼠IL-1β在脊髓上的免疫熒光結(jié)果顯示:與假模組相比較，CCI損傷后IL-1β的表達(dá)上調(diào)（P＜0.01）;與模型組比較，電針治療對(duì)其表達(dá)上調(diào)有抑制作用(P＜0.01);而與對(duì)側(cè)電針組比較，同側(cè)電針組IL-1β的表

8、達(dá)程度低（P＜0.05）。
　　8.免疫熒光法觀察大鼠脊髓膠質(zhì)細(xì)胞活化:與假模組相比較，模型組慢性神經(jīng)損傷后星形膠質(zhì)細(xì)胞及小膠質(zhì)細(xì)胞的活化明顯增加（P＜0.01），胞體面積明顯增加，細(xì)胞間連接緊密;經(jīng)過(guò)7天的電針治療后，與模型組相比電針組膠質(zhì)細(xì)胞活化面積減?。≒＜0.01）;而與對(duì)側(cè)電針組相比，同側(cè)電針組膠質(zhì)細(xì)胞活化程度較低(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.大鼠CCI造模后出現(xiàn)痛覺(jué)過(guò)敏。電針治療后，大鼠機(jī)械縮足閾

9、值及熱縮足閾值均有不同程度地升高，提示電針有鎮(zhèn)痛作用，且對(duì)側(cè)電針鎮(zhèn)痛和同側(cè)電針鎮(zhèn)痛效果類似。
　　2.電針可能通過(guò)減少DRG神經(jīng)元及脊髓上P2X3受體的表達(dá)，減弱P2X3受體對(duì)ATP的電流幅度及反應(yīng)敏感性來(lái)緩解CCI大鼠的痛覺(jué)過(guò)敏。
　　3.在活體狀態(tài)下，電針和A-317491可能存在一種共同的對(duì)痛覺(jué)過(guò)敏的抑制作用。4.除了干預(yù)介導(dǎo)疼痛的P2X3信號(hào)分子，電針可能也通過(guò)增加NT-3的神經(jīng)保護(hù)作用、抑制IL-1β的炎癥作用及抑