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1、膀胱過度活動(dòng)癥(Overactive bladder,OAB)是一種以癥狀學(xué)診斷為基礎(chǔ)的新的概念。國(guó)際尿控學(xué)會(huì)2002年將OAB的概念正式定義為一種提示下尿路功能障礙的癥狀綜合征,主要表現(xiàn)為尿急,伴或不伴急迫性尿失禁,通常伴有尿頻和夜尿,嚴(yán)重的可因尿不凈導(dǎo)致雙腎、輸尿管積水而形成腎功能損害,從而危及生命。OAB多由逼尿肌的無抑制性收縮所致,其發(fā)病率很高,對(duì)患者的生理和心理發(fā)育均有嚴(yán)重的影響,使生活質(zhì)量下降。 OAB的病因復(fù)雜,
2、目前尚不完全清楚,主要與膀胱尿道神經(jīng)源性、解剖和功能異常有關(guān)。目前雖然對(duì)OAB的治療方法很多,但只能緩解癥狀,不能達(dá)到治愈。因此正確的治療和處理OAB非常必要。 P2X受體是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種嘌呤能ATP受體,它廣泛分布于全身各種組織,主要參與平滑肌的舒張與收縮調(diào)節(jié),在人類的膀胱感覺和逼尿肌收縮方面起重要作用,但其在OAB的發(fā)生、發(fā)展過程中具體機(jī)制尚不完全清楚。由于很難得到人類OAB的組織標(biāo)本,故本研究在成功制做OAB大鼠模型
3、的基礎(chǔ)上,經(jīng)尿動(dòng)力學(xué)檢查確定診斷,獲取OAB大鼠膀胱組織;應(yīng)用RT-PCR、免疫組化等方法檢測(cè)P2X1受體在正常大鼠以及OAB大鼠膀胱逼尿肌中的表達(dá),初步探討P2X1受體在OAB時(shí)膀胱舒縮功能調(diào)節(jié)中的作用及其與膀胱功能障礙的關(guān)系,為臨床治療OAB所引起的膀胱功能障礙提供新的理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)材料 一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雌性Wistar大白鼠32只,3-4個(gè)月,250克左右,購(gòu)自中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院動(dòng)物中心。 二
4、、實(shí)驗(yàn)試劑 總RNA分離試劑(tiands,中國(guó)天澤基因工程有限公司);RT-PCR試劑盒,DNA聚合酶(TAKaRa,大連寶生物工程有限公司);P2X1受體亞型基因mRNA引物為美國(guó)Medline國(guó)立圖書館基因庫檢索基因,計(jì)算機(jī)Primer5.0版軟件自行設(shè)計(jì)(英俊生物技術(shù)有限公司);一抗P2X1受體抗體(chemicon公司,美國(guó)),免疫組化UltraSensitiveTMSP超敏試劑盒(購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司)。
5、 三、主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備 眼科手術(shù)器械;紫外分光光度計(jì)(UV-1201型,SHIMAD2u,Japan);PCR擴(kuò)增儀(Biotron,Germany);臺(tái)式低溫高速離心機(jī)(5417R,EppendorfAG,Germany)水平電泳槽及電泳儀均產(chǎn)自中國(guó);自動(dòng)電泳凝膠成像分析儀(Kodak,1D,USA);Leica RM2025型石蠟切片機(jī)(德國(guó));Nikon型光學(xué)顯微鏡(Nikon Eclipse E800micros
6、cope,Kawasaki,Kanagawa,日本);醫(yī)用微波爐(Galantz)。 實(shí)驗(yàn)方法 1、所有32只大鼠經(jīng)尿動(dòng)力學(xué)檢查無異常后,納入實(shí)驗(yàn)研究。分為正常對(duì)照組(A組,10只)和模型組(B組,22只)。B組大鼠全部進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn),結(jié)扎大鼠膀胱-尿道交界處,造成膀胱出口部分梗阻,再經(jīng)尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè),以充盈期逼尿肌出現(xiàn)無抑制性收縮為診斷OAB的標(biāo)準(zhǔn),根據(jù)OAB的有無將B組再分為B2組(膀胱過度活動(dòng)癥組)和B1組(模型對(duì)照組
7、)。 2、采用RT-PCR、免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)P2X1受體在正常大鼠和OAB大鼠逼尿肌中的表達(dá)情況,探討P2X1受體在OAB膀胱功能調(diào)節(jié)中的作用及其與膀胱功能障礙的關(guān)系。 3、所有數(shù)據(jù)均以-x±s表示,采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn),P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果: 一、動(dòng)物模型及尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè)結(jié)果 A組10只大鼠全部存活,無OAB出現(xiàn),膀胱壁光滑,彈性良好。B組22只大鼠,
8、因尿路感染等原因死亡3只,存活19只。經(jīng)尿動(dòng)力學(xué)檢測(cè),A組膀胱充盈期曲線平滑,無逼尿肌收縮,排尿期逼尿肌反射正常(18.1±4.7cmH2O);最大膀胱灌注量為0.5ml;B組中52%(10/19)存在OAB(B2組),表現(xiàn)為膀胱壁增厚,彈性較差。膀胱在充盈期有不規(guī)律的無抑制性收縮,逼尿肌收縮時(shí)于尿道外口有尿液溢出,單位時(shí)向內(nèi)非抑制性收縮的發(fā)生頻率為(2.9±1.2次/min),排尿期未見明顯的逼尿肌反射;B組中47%(9/19)無OA
9、B(B1組),表現(xiàn)為膀胱壁光滑,彈性良好。膀胱于充盈期未見明顯的逼尿肌收縮及溢尿現(xiàn)象。 二、RT-PCR結(jié)果 A組、B1組及B2組的膀胱逼尿肌中均有P2X1受體mRNA的表達(dá),其相對(duì)表達(dá)量分別為(1.805±0.102)、(1.821±0.068)和(1.968±0.063)。P2X1受體mRNA在B2組大鼠膀胱逼尿肌中的表達(dá)較A、B1組高,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。B1組P2X1受體mRNA較A組表達(dá)無明顯差異
10、,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.737) 三、免疫組織化學(xué)結(jié)果 A組、B1組及B2組中膀胱逼尿肌細(xì)胞的胞漿中均有P2X1受體的表達(dá),B2組與A組、B1組相比,膀胱粘膜增厚,肌纖維增粗,肌絲紊亂,其膀胱逼尿肌中免疫陽性顆粒呈現(xiàn)深染,較A組、B1組數(shù)量明顯增多。A組、B1組膀胱逼尿肌中黃褐色免疫陽性顆粒數(shù)量較少,顏色較淺,二者無明顯差異。 結(jié)論: 1、大鼠的下尿路梗阻,可引起膀胱的神經(jīng)和功能性損害繼而出現(xiàn)OAB,因
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