廣州管圓線蟲分泌蛋白基因AC16的克隆表達及免疫學鑒定.pdf

1、中山大學碩士學位論文廣州管圓線蟲分泌蛋白基因AC16的克隆表達及免疫學鑒定姓名：李正宇申請學位級別：碩士專業(yè)：病原生物學指導教師：吳忠道20090605中山大學碩士學位論文◇研究目的在前期工作的基礎(chǔ)上，對可能的廣州管圓線蟲分泌蛋白基因ACl6進行克隆表達，并對其免疫學特性進行了初步驗證，為開展進一步對廣州管圓線蟲功能蛋白的研究提供實驗依據(jù)。研究方法1候選基因的序列分析及生物學鑒定11候選基因的生物信息學分析隨機挑取廣卅I管圓線蟲成蟲cD

2、NA文庫的單個噬菌斑，采用多聚酶鏈反應(PCR)技術(shù)擴增出候選噬菌斑的插入片段，運用直接測序技術(shù)測定插入cDNA片段的核苷酸序列，經(jīng)編輯后的序列通過NCBI(TheNationalCenterforBiotechnologyInformation)數(shù)據(jù)庫中的ORFfinder查找核酸開放閱讀框(Openreadingframe，ORE)，并推測相應氨基酸序列，然后用BLAST(BasicLocalAlignmentSearchT001)

3、進行同源性分析，使厙]http：／／caexpasyorg／tools暖J站的分析軟件對蛋白進行結(jié)構(gòu)分析與功能預測。12候選基因的基因結(jié)構(gòu)分析121候選基因的mRNA轉(zhuǎn)錄水平分析(RTPcR)提取廣州管圓線蟲成蟲以及四期幼蟲總RNA并反轉(zhuǎn)錄合成相應的eDNA，采用RTPCR對候選編碼基因在不同蟲期的相對表達水平進行分析。122候選基因DNA和mRNA序列的差異提取廣州管圓線蟲的基因組DNA，以候選基因的特異性引物進行PCR，擴增得到的序