廣州管圓線蟲半乳凝素基因的克隆表達、蛋白純化及免疫反應性研究.pdf

1、廣州管圓線蟲病(Angiostrongyliasjs)是由廣州管圓線蟲(Angiostrongyluscantonensis)感染而引起的。作為一種新發(fā)的食源性傳染性疾病，廣州管圓線蟲病在全球的流行都呈現(xiàn)出上升的趨勢，對人類的威脅也越來越大。廣州管圓線蟲主要侵犯中樞神經系統(tǒng)，引起嗜酸性粒細胞增多性腦膜炎或腦膜腦炎。患該病后，絕大多數(shù)患者有頭痛、肌肉痛、惡心、嘔吐、感覺異常、觸摸痛、發(fā)熱、畏光、視力模糊、嗜睡、頸硬等癥狀。其中以頭痛最突出

2、，患者自訴“頭痛欲裂”或忍受不了；全身疼痛、皮膚過敏的現(xiàn)象也比較嚴重；個別病人還會出現(xiàn)精神病樣癥狀。我國是廣州管圓線蟲病的主要流行區(qū)之一，近幾年的發(fā)病數(shù)逐漸增多，甚至出現(xiàn)了爆發(fā)流行。如何有效地防治廣州管圓線蟲病已成為亟待解決的重要問題。 在廣州管圓線蟲病的防治工作中，診斷是關鍵。診斷明確，治療及時，則病人的轉歸一般良好。但目前國內外都還缺乏敏感特異、能產業(yè)化生產、標準化的診斷試劑盒。針對目前這個難點問題，本論文進行了以下研究：

3、 一、廣州管圓線蟲半乳凝素基因的獲取及生物信息學分析應用EST策略，從廣州管圓線蟲腦期幼蟲cDNA文庫中克隆了半乳凝素基因(AcGal)的全長cDNA序列，并已在GenBank中登錄(登錄號為DQ384534)。AcGal基因與秀麗桿線蟲半乳凝素-10 高度同源。從保守結構域的搜索結果可知，AcGal具有半乳凝素結構域，該結構域能專一性地與β-半乳糖苷結合，如乳糖，而不需要金屬離子的活化。半乳凝素以二聚體或三聚體結構域存在。

4、 二、廣州管圓線蟲半乳凝素基因在大腸桿菌中的表達及免疫反應性分析PCR擴增AcGal cDNA全長序列后克隆入pET32a(+)載體進行誘導表達，包涵體經洗滌、變性、逐步透析復性，濃縮后進行聚丙烯酰胺凝膠電泳及免疫印跡。AcGal基因在大腸桿菌中以包涵體的形式表達，表達產物與感染廣州管圓線蟲的大鼠血清有明顯的免疫反應性，具有診斷用抗原的應用前景。 綜上所述，本研究利用本室構建的廣州管圓線蟲幼蟲cDNA文庫首次篩選克隆了廣州管圓