AKT3在乳腺癌組織中的表達(dá)及對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的研究.pdf

1、乳腺癌是世界各地女性中最為常見的惡性腫瘤，也是導(dǎo)致女性死亡的主要原因之一。在查閱大量文獻(xiàn)和本室原有工作的基礎(chǔ)上，本研究應(yīng)用免疫組化、腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)、Western blot、DNA Ladder測定等技術(shù)，探討蛋白激酶Bγ(AKT3)在乳腺浸潤型導(dǎo)管癌中的表達(dá)及其對乳腺浸潤型導(dǎo)管癌BT474細(xì)胞生物學(xué)行為的影響，旨在為闡明其作用及可能的作用機(jī)制，并為發(fā)現(xiàn)可能的藥物治療作用靶點(diǎn)奠定基礎(chǔ)。
　　本研究第一部分首先應(yīng)用免疫組化方法測定AKT

2、3在80例乳腺浸潤型導(dǎo)管癌及與其配對的相同患者的癌旁組織樣本中的表達(dá)、并對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析、判斷其在癌及癌旁組織中的表達(dá)與患者臨床病理特性的關(guān)系。結(jié)果表明：在80例乳腺浸潤型導(dǎo)管癌樣本中， AKT3過表達(dá)的共57例，過表達(dá)率為71.2％，秩和檢驗(yàn)(Wilcoxon)結(jié)果顯示：AKT3在癌與癌旁組織中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。AKT3在乳腺浸潤型導(dǎo)管中的過表達(dá)與患者的年齡、腫瘤大小無關(guān)，但與腫瘤TN M分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密

3、切相關(guān)。免疫組化結(jié)果表明：AKT3的過表達(dá)與乳腺浸潤型導(dǎo)管癌的轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。
　　以第一部分的結(jié)果為依據(jù)，本研究的第二、三部分著眼于探討AK T3對乳腺浸潤型導(dǎo)管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　本研究第二部分設(shè)計引物，應(yīng)用RT-PCR法從流產(chǎn)胎兒腦組織總RNA中擴(kuò)增AKT3基因cDNA，以XhoI及BglII酶切位點(diǎn)克隆入腺病毒pShuttle-IRES-hrGFP-1穿梭質(zhì)粒中，測序鑒定后與骨架載體 PAdeasy-1同源重

4、組，以脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染293A細(xì)胞，在293A細(xì)胞中包裝和擴(kuò)增并進(jìn)行病毒滴度的測定；再用Akt3重組腺病毒顆粒轉(zhuǎn)導(dǎo)乳腺浸潤型導(dǎo)管癌BT474細(xì)胞株，Western-blot和RT-PCR檢測并篩選出AKT3蛋白或mRNA表達(dá)最高的Akt3腺病毒及細(xì)胞，結(jié)果表明成功地構(gòu)建pAd-AKT3腺病毒表達(dá)載體、成功地獲得了AKT3過表達(dá)的BT474細(xì)胞株，保證了后續(xù)的研究。
　　本研究第三部分主要針對AKT3對乳腺浸潤型導(dǎo)管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響

5、進(jìn)行初步的探討。通過應(yīng)用MTT試驗(yàn)測定細(xì)胞增殖、DNA Ladder方法測定細(xì)胞凋亡、軟瓊脂集落形成實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞致瘤性等生物學(xué)行為，分析上述AKT3過表達(dá)的乳腺浸潤型導(dǎo)管癌細(xì)胞株的生物學(xué)行為的改變(以轉(zhuǎn)導(dǎo)空載體腺病毒顆粒為對照)，初步判斷AK T3對乳腺浸潤型導(dǎo)管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。結(jié)果表明：乳腺浸潤型導(dǎo)管癌BT474細(xì)胞過表達(dá)AKT3后，其細(xì)胞增殖增強(qiáng)，凋亡較少，致瘤性增加，統(tǒng)計學(xué)結(jié)果表明與轉(zhuǎn)導(dǎo)空載體的對照比較，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義