PCR-反向點雜交法與DNA直接測序法檢測HBV耐藥變異與基因型的比較研究.pdf

1、目的:
　　 用PCR-反向點雜交法和DNA直接測序法兩種方法檢測乙型肝炎病毒基因耐藥位點的突變情況以及基因型，并進行比較分析，進一步證實PCR-反向點雜交法是一種快速，準確發(fā)現(xiàn)核苷類藥物治療后耐藥位點的檢測方法。同時將檢測結(jié)果與臨床資料進行分析，進一步探討乙型肝炎病毒耐藥變異與基因型、肝功能檢測指標、HBVDNA病毒載量等的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 收集102例服用核苷類藥物治療的慢性乙型肝炎患者血清標本，

2、采用PCR-反向點雜交法和DNA直接測序法檢測HBV的耐藥突變位點以及基因型，并對HBV耐藥變異與基因型、肝功能檢測指標、HBV DNA病毒載量等指標進行相關(guān)性分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.兩種檢測方法準確度比較:在102例服用核苷類藥物的慢性乙型肝炎患者血清中，PCR-反向點雜交法檢出耐藥突變株79例，變異率為77.5％;其中180M和204I突變株48例，占60.8％;204V突變株22例，占27.8％;181V突

3、變株9例，占11.4％; HBV基因型中B基因型10例，C基因型84例，D基因型1例。DNA-直接測序法檢出耐藥變異株84例，其變異率為82.4％，共檢出5種變異位點，其中分別為180M和204I突變株50例，占59.5％;204V突變株24例，占28.6％;181V突變株9例，占10.7％;202G1例，占1.2％。其中12份標本為B型，占11.8％;89份標本為C型，占87.3％;1份標本為D型，占0.9％。兩種方法的準確度經(jīng)x2檢

4、驗，無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.兩種檢測方法靈敏度的比較:HBV DNA水平在＜1000copies/ml的血清中，PCR-反向點雜交法無法檢出突變株;DNA-直接測序法檢出耐藥突變株5例。在相同HBV DNA檢測水平下，PCR-反向點雜交法和DNA直接測序法能同時檢出變異株與野生株，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 3.將檢測結(jié)果與臨床資料進行相關(guān)性分析:乙肝患者的耐藥變異位點與基因型、肝功能

5、指標無相關(guān)性(P＞0.05)，與HBV DNA病毒載量有一定相關(guān)性(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.PCR-反向點雜交法靈敏度和準確度與DNA直接測序法（金標準方法）檢測相符率高。
　　 2.PCR-反向點雜交法是一種快速，準確發(fā)現(xiàn)核苷類藥物治療后耐藥位點的檢測方法。
　　 3.檢測結(jié)果與臨床相關(guān)性分析，乙型肝炎耐藥變異位點與基因型、肝功能檢測指標無相關(guān)性，而與HBV DNA病毒載量等指標有一定