實(shí)時(shí)熒光PCR法檢測(cè)HBV拉米夫定耐藥突變及其相關(guān)因素分析研究.pdf

1、拉米夫定是目前國(guó)際公認(rèn)的對(duì)乙肝病毒復(fù)制具有確切抑制作用的核苷類似物，臨床應(yīng)用日益廣泛，但拉米夫定在治療過(guò)程中出現(xiàn)的HBV病毒變異可導(dǎo)致病毒的耐藥及病情復(fù)發(fā)甚至加重，因此，建立有效的病毒變異檢測(cè)方法，發(fā)現(xiàn)影響病毒變異發(fā)生的相關(guān)因素，必將對(duì)該病的臨床診斷治療起到積極作用。 [目的]：采用實(shí)時(shí)熒光聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)檢測(cè)慢性乙型肝炎和乙肝肝硬化患者在使用拉米夫定過(guò)程中，乙型肝炎病毒YMDD變異的發(fā)生情況，并研究影響變異發(fā)生的相關(guān)

2、因素，為臨床預(yù)測(cè)和判斷HBVYMDD變異提供一定的依據(jù)。 [方法]：設(shè)計(jì)包含兩個(gè)變異位點(diǎn)(I/V)和無(wú)變異參照位點(diǎn)的3條下游引物，與同一條上游引物和探針建立3管PCR反應(yīng)體系，對(duì)采用拉米夫定治療的249例慢性乙型肝炎和64例乙肝肝硬化患者的300份血清通過(guò)實(shí)時(shí)熒光PCR反應(yīng)后的CT值判斷是否發(fā)生已知(I/V)位點(diǎn)變異。并應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)YMDD變異的發(fā)生率及影響因素進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 [結(jié)果]： 1.所有病例

3、在整個(gè)隨訪過(guò)程中共有74例發(fā)生YMDD變異，其中YIDD35例，YVDD23例，YIDD/YVDD共生變異16例. 2.隨治療時(shí)間的延長(zhǎng)，YMDD變異的累積發(fā)生率逐漸提高，慢性乙型肝炎和乙肝肝硬化患者的YMDD變異的累積發(fā)生率于12、24、36、48個(gè)月分別為：8.84％和17.19％，20.91％和32.40％，26.92％和39.56％，26.92％和58.79％。 3.Long-rank分析發(fā)現(xiàn)，年齡大于20歲，治

4、療前ALT、AST水平偏低，基線HBVDNA水平較高，高水平HBeAg定量，HBeAg陰性，治療過(guò)程中未實(shí)現(xiàn)HBeAg血清轉(zhuǎn)換，治療12周時(shí)HBVDNA仍在檢測(cè)水平以上以及診斷肝硬化，未聯(lián)合干擾素(單用拉米夫定)者均與YMDD變異的較早出現(xiàn)有關(guān)(P＜0.05)。 4.Cox回歸分析顯示末聯(lián)合干擾素、基線ALT水平較低、HBVDNA水平較高、未出現(xiàn)HBeAg血清轉(zhuǎn)換者與YMDD變異獨(dú)立相關(guān)。 [結(jié)論]： 1.實(shí)時(shí)熒

5、光PCR法檢測(cè)HBV拉米夫定耐藥突變快速、簡(jiǎn)單、靈敏，成本-效益比高。 2.慢性乙型肝炎和乙肝肝硬化患者，在拉米夫定治療過(guò)程中，都隨著用藥時(shí)間的延長(zhǎng)，YMDD變異的累積發(fā)生率逐漸提高。 3.基線ALT水平較低者、基線HBVDNA水平較高者、HBeAg陰性、HBeAg定量較高者YMDD變異的累積發(fā)生率較高。 4.治療12周時(shí)HBVDNA水平降至檢測(cè)水平以下者，治療過(guò)程中出現(xiàn)HBeAg血清轉(zhuǎn)換者，YMDD變異的累積發(fā)