RNA干擾CXCR4和CXCR7對子宮內(nèi)膜癌細胞生物學(xué)功能的影響.pdf

1、目的：本研究通過利用siRNA（small interference RNA）沉默趨化因子受體CXCR4和CXCR7基因的表達，探討其對子宮內(nèi)膜癌細胞株生物學(xué)功能的影響。
　　方法：①通過半定量RT-PCR及western blotting檢測人子宮內(nèi)膜癌細胞株中趨化因子受體CXCR4/CXCR7及其配體CXCL12的表達；
　　②針對人 CXCR4和CXCR7基因設(shè)計合成靶向特異性 siRNA（小分子干擾RNA），利用Li

2、pofectamineTM2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染劑瞬時轉(zhuǎn)染至人子宮內(nèi)膜癌Ishikawa和HEC-1-A細胞株，應(yīng)用RT-PCR及western blotting驗證干擾效果；
　?、弁ㄟ^CCK-8、流式細胞術(shù)和Transwell法分別檢測CXCR4和CXCR7基因沉默對Ishikawa和HEC-1-A增殖、細胞周期和侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：①Ishikawa和HEC-1-A細胞株均見CXCR4、CXCR7和CXCL12 m

3、RNA和蛋白的表達；
　　②將研究合成的CXCR4-siRNA、CXCR7-siRNA及CXCR4-siRNA/CXCR7-siRNA轉(zhuǎn)染至 Ishikawa和HEC-1-A細胞株后，均可分別并成功干擾 CXCR4、CXCR7、CXCR4/CXCR7基因或蛋白的表達，通過半定量RT-PCR和western blotting檢測分析發(fā)現(xiàn)干擾后細胞mRNA和蛋白的表達量明顯下調(diào)；
　　③在CCK-8、Transwell及流式細胞

4、術(shù)實驗中，CXCR4和CXCR7的單獨沉默和聯(lián)合沉默均可導(dǎo)致Ishikawa和HEC-1-A細胞株增殖能力和趨化侵襲能力明顯降低，同時引發(fā)Ishikawa和HEC-1-A細胞周期出現(xiàn)S期阻滯。
　　結(jié)論：通過應(yīng)用siRNA靶向沉默CXCR4和CXCR7后，子宮內(nèi)膜癌細胞株Ishikawa和HEC-1-A的增殖和侵襲能力均降低，并在細胞周期中出現(xiàn)S期阻滯。結(jié)果提示趨化因子受體CXCR4和CXCR7在Ishikawa和HEC-1-A細