慢病毒介導的ShRNA干擾CXCR4對卵巢癌細胞侵襲能力的影響.pdf

1、卵巢癌是當前女性發(fā)病率較高的惡性腫瘤，現(xiàn)階段的研究仍不能明確其病發(fā)原因，且卵巢內分泌功能以及組織解剖較復雜，初期癥狀不易察覺，就診時間晚，發(fā)生大面積的擴散轉移的患者占多數(shù)；目前對卵巢癌的治療多采用腫瘤減滅手術及鉑類聯(lián)合化療，但由于手術很難完全清除病灶，化療也易產生耐藥性，以至于卵巢癌的預后極差，死亡率居于婦科腫瘤之首，因此，探尋卵巢癌新的治療方式已成為當前研究的熱門。趨化因子受體CXCR4屬于7次跨膜的G蛋白偶聯(lián)受體家族，與其特異性配體

2、SDF-1構成SDF-1/CXCR4生物軸，并參與多種反應。關于乳腺癌的研究顯示，CXCR4具有很強的侵襲和促血管生成能力，與惡性腫瘤的侵襲轉移密切相關。有研究證明，在卵巢癌中，采用免疫組化方法檢測CXCR4，得出正常上皮組織中CXCR4表達呈陰性，在癌組織及腹水中成陽性表達。
　　目的：旨在采用RNA干擾技術，抑制卵巢癌細胞株中CXCR4的表達，RT-PCR、Western blotting檢測抑制CXCR4后細胞株中CXCR4

3、的表達；Tramswell細胞小室檢測干擾CXCR4后細胞株的侵襲能力，從而了解CXCR4對于卵巢癌的轉移、侵襲能力的影響，并為卵巢癌的治療找到一個新的靶點。
　　方法：選用在線設計軟件設計短發(fā)夾RNA(shRNA),同源性檢索準確后進行合成,酶切，連入帶有綠色熒光的慢病毒載體，挑取陽性質粒送交陽性克隆測序鑒定后,測序，轉染卵巢癌細胞株SKOV3，利用RT-PCR和Western blotting檢測細胞株中CXCR4的表達，Tr

4、answell小室檢測干擾CXCR4表達后細胞株中CXCR4的表達及細胞的侵襲力。
　　結果：成功構建特異性干擾載體pLVshRNA‐EGFP-PuroCXCR4，轉染卵巢癌細胞SKOV3后,通過RT-PCR及Western blotting檢測CXCR4 mRNA及CXCR4蛋白的表達，結果顯示:CXCR4-shRNA組的CXCR4 mRNA及蛋白表達量明顯對照組及陰性組,具有顯著性差異(P<0.05)，Transwell細胞侵

5、襲實驗結果表明:慢病毒載體轉染卵巢癌細胞株24h后，對照組、陰性組和實驗組三組穿膜的細胞數(shù)量分別為和54.018±2.368、57.133±3.214和22.184±2.185，陰性組的抑制率為-5.78％（P＞0.05），實驗組的抑制率為58.94%（P＜0.01）具有顯著性差別，而空白組與對照組相比數(shù)值沒有明顯的減少，無顯著性差異(P＞0.05)。
　　結論：特異性干擾慢病毒載體轉染卵巢癌細胞可以降低卵巢癌細胞SKOV3中CX