小干擾RNA對LNCaP細(xì)胞CXCR4基因表達的影響.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:研究小干擾RNA(siRNA)對前列腺癌(Prostatecancer,Pca)細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞中CXC趨化因子受體4(CXCR4)mRNA表達的影響。 方法:選擇人CXCR4基因的一個靶點,體外合成siRNA的DNA模板,經(jīng)退火后插入到質(zhì)粒Psilencer2.1-U6neo載體的多克隆位點,構(gòu)建siRNA表達載體。重組表達質(zhì)粒在脂質(zhì)體Lipofectamine2000介導(dǎo)下轉(zhuǎn)染人前列腺癌細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞,用RT

2、-PCR方法檢測重組體對CXCR4mRNA表達水平的影響。實驗設(shè)立空白對照組、陰性對照Psilencer-C轉(zhuǎn)染組、和目的組Psilencer-siCXCR4轉(zhuǎn)染組。 結(jié)果:經(jīng)酶切、測序證明重組質(zhì)粒Psilence-siCXCR4構(gòu)建成功;該重組體轉(zhuǎn)染LNCaP48小時后,RT-PCR檢測結(jié)果顯示CXCR4/β-actin條帶光密度比值分別為:空白對照組為0.61±0.03;陰性對照組為0.59±0.04;目的組為0.15±0.

3、01??瞻讓φ战M與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.01),目的組分別與空白對照組、陰性對照組比較,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01);其抑制率為(75.00±3.16)%,表明LNCaP細(xì)胞中CXCR4mRNA表達受到明顯抑制。 結(jié)論:本實驗所設(shè)計的RNA干擾序列、構(gòu)建的RNA干擾重組體有效地抑制了前列腺癌細(xì)胞株LNCaP細(xì)胞中CXCR4mRNA的表達,與我們的預(yù)期結(jié)果一致。我們結(jié)果與許多國內(nèi)外的研究結(jié)果相符。說明RNA

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