11C-PD153035PET顯像對(duì)非小細(xì)胞肺癌EGFR-TKI治療敏感性預(yù)測(cè)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　探討EGFR-TKI敏感性不同的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系11C-PD153035放射性攝取能力與EGFR-TKI敏感性及pEGFR表達(dá)之間的關(guān)系。通過對(duì)荷瘤裸鼠11C-PD153035PET-CT顯像，分析移植瘤顯像結(jié)果與EGFR-TKI敏感性、pEGFR蛋白表達(dá)之間的關(guān)系。為11C-PD153035PET-CT受體顯像應(yīng)用于臨床NSCLS個(gè)體化治療，進(jìn)行TKI療效預(yù)測(cè)提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:
　　(1)改進(jìn)

2、合成路線，合成并標(biāo)記表皮生長(zhǎng)因子受體顯像劑11C-PD153035，行11C-PD153035裸鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)。
　　(2)選擇4種人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞HCC827、PC9、A549和H1975，進(jìn)行體外培養(yǎng)。采用MTT法檢測(cè)厄洛替尼對(duì)上述4種細(xì)胞作用72小時(shí)后的生長(zhǎng)抑制率，并計(jì)算藥物對(duì)4種細(xì)胞的IC50。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HCC827、PC9、A549和H1975與11C-PD153035共同孵育，比較EGFR-TKI敏感性不同的細(xì)胞

3、11C-PD153035放射性攝取特征，繪制4種細(xì)胞γ攝取值隨時(shí)間變化曲線。采用Western Blot方法檢測(cè)4種細(xì)胞EGFR和pEGFR表達(dá)水平，分析各組細(xì)胞EGFR、pEGFR表達(dá)水平與EGFR-TKI敏感性及與11C-PD153035放射性攝取的相關(guān)性。行11C-PD153035放射性攝取體外阻斷實(shí)驗(yàn)，觀察不同濃度厄洛替尼和西妥昔單抗作用下4種細(xì)胞pEGFR表達(dá)水平及11C-PD153035放射性攝取的變化，并進(jìn)行兩者的相關(guān)性分

4、析。
　　(3)構(gòu)建EGFR-TKI敏感性不同的人非小細(xì)胞肺癌HCC827、PC9、A549和H1975移植瘤裸鼠動(dòng)物模型，并行11C-PD153035PET-CT顯像。采用免疫組化方法檢測(cè)移植瘤標(biāo)本EGFR、pEGFR表達(dá)水平，分析4種移植瘤EGFR、pEGFR表達(dá)率、表達(dá)水平與EGFR-TKI敏感性及11C-PD153035放射性攝取的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　(1)改進(jìn)11C-PD153035合成路徑，成功合成1

5、1C-PD153035注射劑，其化學(xué)純度大于95％，放射化學(xué)純度大于99％。標(biāo)記率達(dá)30％-45％。
　　(2)11C-PD153035裸鼠體內(nèi)分布研究顯示:11C-PD153035在腦、腫早期放射性活性高，但下降速度快，可為肺、腦腫瘤的顯像提供良好的正常組織對(duì)比，但11C-PD153035在腹部臟器代謝較高且持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，腹部臟器的顯像影響較大。
　　(3)EGFR-TKI敏感性不同的4種人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞厄洛替尼生長(zhǎng)抑制

6、實(shí)驗(yàn)顯示:厄洛替尼對(duì)4種細(xì)胞均有不同程度抑制(p＜0.05)，以HCC827和PC9細(xì)胞抑制率較高，其IC50分別為0.0054μM和0.034μM;對(duì)A549細(xì)胞的抑制率稍低，IC50為0.824μM;對(duì)H1975細(xì)胞的抑制率最低，IC50達(dá)8.339μM。
　　(4)EGFR-TKI敏感性不同的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系11C-PD153035放射性攝取的體外實(shí)驗(yàn)顯示:HCC827為EGFR-TKI高度敏感細(xì)胞系，11C-PD153

7、035放射性攝較高、較早，呈遞減型曲線;PC9亦為EGFR-TKI高度敏感細(xì)胞系，11C-PD153035放射性攝取隨孵育時(shí)間延長(zhǎng)呈單峰性改變，峰值γ攝取值明顯高于TKI抵抗的H1975細(xì)胞;A549細(xì)胞為TKI中度敏感細(xì)胞系，雖峰值γ攝取值高于TKI抵抗的H1975細(xì)胞，但無顯著性差異。
　　(5)4種人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系EGFR、pEGFR表達(dá)的檢測(cè)顯示:HCC827細(xì)胞EGFR表達(dá)水平稍高,但與PC9、A549和H1975細(xì)

8、胞比較總體無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異.4種細(xì)胞pEGFR表達(dá)差異較大，HCC827細(xì)胞的pEGFR表達(dá)最高，高于PC9、A549和H1975細(xì)胞;PC9細(xì)胞pEGFR表達(dá)水平較高，高于H1975細(xì)胞;PC9與A549、A549與H1975細(xì)胞pEGFR表達(dá)無顯著性差異。
　　(6)EGFR-TKI敏感性不同細(xì)胞11C-PD153035放射性攝取與細(xì)胞pEGFR表達(dá)相關(guān)性分析顯示兩者呈正相關(guān)(r=0.790，p=0.002)。
　　(7)1

9、1C-PD153035放射性攝取的體外阻斷實(shí)驗(yàn)顯示:HCC827、PC9和A549細(xì)胞隨厄洛替尼濃度增大，pEGFR表達(dá)程度減低(p＜0.05)，H1975細(xì)胞pEGFR表達(dá)程度則無明顯變化;HCC827和PC9細(xì)胞的11C-PD153035放射性攝取值亦隨厄洛替尼濃度增加而減低，A549和H1975細(xì)胞11C-PD153035放射性攝取無明顯變化;HCC827和PC9細(xì)胞的放射性攝取值與pEGFR表達(dá)水平呈正相關(guān)。
　　(8)4

10、種人非小細(xì)胞肺癌移植瘤PET-CT顯像實(shí)驗(yàn)顯示:HCC827移植瘤于注射11C-PD153035后5分鐘即開始出現(xiàn)腫瘤區(qū)放射性濃聚，40分鐘T/N值達(dá)高峰，隨后逐步下降，至掃描結(jié)束腫瘤區(qū)放射性濃聚仍保持較高水平;PC9移植瘤放射性攝取低于HCC827移植瘤，T/N值高峰出現(xiàn)較早(25分鐘)，后逐漸下降;A549、H1975移植瘤放射性攝取明顯低于HCC827，且不同時(shí)間點(diǎn)T/N值無顯著性差異。
　　(9)4種人非小細(xì)胞肺癌移植瘤的

11、EGFR、pEGFR表達(dá)結(jié)果顯示:各組細(xì)胞移植瘤EGFR表達(dá)率無明顯差異。不同細(xì)胞移植瘤pEGFR表達(dá)不同，HCC827移植瘤pEGFR表達(dá)率和表達(dá)水平均最高，明顯高于PC9、A549和H1975移植瘤。PC9移植瘤pEGFR表達(dá)率、表達(dá)水平高于A549和H1975移植瘤，A549和H1975移植瘤之間無顯著性差異。
　　(10)4種人非小細(xì)胞肺癌移植瘤PET-CT顯像T/N值與pEGFR表達(dá)評(píng)分的相關(guān)性分析，結(jié)果顯示:HCC82

12、7、PC9移植瘤T/N值與pEGFR表達(dá)評(píng)分呈正相關(guān)(HCC827:r=0.974，PC9:r=0.960)，A549、H1975移植瘤T/N值與pEGFR表達(dá)評(píng)分相關(guān)性較低（A549:r=:0.216，H1975:r=0.558）。
　　結(jié)論:
　　(1)改進(jìn)的11C-PD153035合成路徑成熟，放射化學(xué)純度高，標(biāo)記率適宜，為較理想的表皮生長(zhǎng)因子受體PET顯像劑。體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)證實(shí)11C-PD153035適于肺、腦腫瘤的P

13、ET顯像。
　　(2)EGFR-TKI敏感程度不同的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞對(duì)11C-PD153035放射性攝取水平具有按EGFR-TKI敏感程度由高向低依次減低的趨勢(shì)。4種細(xì)胞系pEGFR表達(dá)水平依EGFR-TKI敏感程度減低而減低。11C-PD153035放射性攝取與細(xì)胞pEGFR表達(dá)水平呈正相關(guān)。
　　(3)11C-PD153035放射性攝取的體外阻斷實(shí)驗(yàn)顯示:HCC827、PC9和A549細(xì)胞隨厄洛替尼濃度增大，pEGFR

14、表達(dá)程度減低;HCC827和PC9細(xì)胞的11C-PD153035放射性攝取值亦隨厄洛替尼濃度增大而減低。HCC827和PC9細(xì)胞的放射性攝取值與pEGFR表達(dá)水平呈正相關(guān)。
　　(4)4種人非小細(xì)胞肺癌移植瘤PET-CT顯像實(shí)驗(yàn)顯示EGFR-TKI高敏感性細(xì)胞HCC827和PC9移植瘤11C-PD153035放射性攝取較高，EGFR-TKI中度敏感細(xì)胞A549和抵抗細(xì)胞H1975移植瘤放射性攝取明顯低于HCC827移植瘤。