抑制STAT3增強(qiáng)非小細(xì)胞肺癌對(duì)吉非替尼藥物敏感性的研究.pdf

1、目的：以全球范圍而言，肺癌是在癌癥死亡率中占主要地位的癌癥類型，85％以上的肺癌為非小細(xì)胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC），手術(shù)治療是其首選的治療方法，但術(shù)后遠(yuǎn)期生存率持續(xù)＜15%。因此，探索能提供有效治療的靶分子是目前研究NSCLC的重要方向。吉非替尼(Gefitinib，又稱Iressa)已被20多個(gè)國(guó)家批準(zhǔn)用于治療晚期NSCLC，屬于表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal growth fac

2、tor receptor，EGFR)酪氨酸激酶抑制劑(Tyrosine kinase inhibitor， TKI)的一種。但近來(lái)研究指出，幾乎所有原先對(duì)吉非替尼治療有效的NSCLC患者在經(jīng)過(guò)一段時(shí)間（6-12個(gè)月）的緩解期后出現(xiàn)疾病進(jìn)展，即獲得性耐藥。在此基礎(chǔ)上，研究者認(rèn)為，在臨床上急需更加針對(duì)、更有效的策略來(lái)逆轉(zhuǎn)藥物耐受的現(xiàn)象。STAT3（signal transducers and activators of transcript

3、ion3，信號(hào)轉(zhuǎn)錄傳導(dǎo)子與激活子3）是EGFR下游信號(hào)通路JAK2-STAT3的關(guān)鍵因子，它的持續(xù)激活可使腫瘤細(xì)胞中細(xì)胞周期調(diào)控因子和抗凋亡蛋白表達(dá)上調(diào)，從而促進(jìn)惡性腫瘤的異常增殖和轉(zhuǎn)化，并在多種類型癌癥的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。雖然目前已有文獻(xiàn)報(bào)道STAT3蛋白，尤其是磷酸化的STAT3與其目的基因在某種耐藥細(xì)胞中異常激活或過(guò)度表達(dá)，但STAT3蛋白是否參與NSCLC對(duì)吉非替尼的耐藥及其耐藥的具體機(jī)制仍不清楚，抑制STAT3的活化如何能

4、夠增強(qiáng)NSCLC對(duì)吉非替尼的敏感性還有待進(jìn)一步探索。
　　方法：⑴CCK-8方法檢測(cè)吉非替尼耐藥的NSCLC細(xì)胞H1975和敏感的PC9細(xì)胞經(jīng)不同濃度吉非替尼處理后腫瘤細(xì)胞抑制率的變化， Western blot方法檢測(cè)兩種細(xì)胞中STAT3蛋白的表達(dá)水平。⑵不同濃度STAT3通路抑制劑AG490或特異性抑制劑JSI-124(CucurbitacinI，葫蘆素)處理H1975細(xì)胞后，用Western blot和RT-PCR方法檢測(cè)S

5、TAT3和相關(guān)基因的蛋白、mRNA表達(dá)水平的變化。CCK-8法檢測(cè)經(jīng)AG490或JSI-124處理的H1975細(xì)胞對(duì)吉非替尼藥物敏感性的變化。流式細(xì)胞儀法檢測(cè)經(jīng)不同方式處理后H1975細(xì)胞凋亡水平的改變。⑶不同濃度的STAT3特異性抑制劑JSI-124處理H1975細(xì)胞后，Western blot和RT-PCR方法檢測(cè)多藥耐藥蛋白MDR1的蛋白表達(dá)水平及mRNA表達(dá)水平的變化。
　　結(jié)果：①CCK-8結(jié)果顯示對(duì)吉非替尼敏感的PC9

6、細(xì)胞的細(xì)胞抑制率高于耐藥的H1975細(xì)胞，Western blot結(jié)果顯示H1975細(xì)胞中磷酸化STAT3的蛋白表達(dá)水平明顯高于PC9細(xì)胞。②不同濃度STAT3通路抑制劑AG490或特異性抑制劑JSI-124處理H1975細(xì)胞后，Western blot結(jié)果示磷酸化STAT3的蛋白表達(dá)水平隨抑制劑濃度的增加而減少，凋亡蛋白BCL-2的蛋白表達(dá)水平也隨之下降，RT-PCR示STAT3和細(xì)胞增殖因子cyclinD1的mRNA水平也隨著抑制濃

7、度的加大而逐漸減少。CCK-8示JSI-124處理的H1975細(xì)胞對(duì)吉非替尼藥物敏感性明顯增加。流式細(xì)胞儀結(jié)果示JSI-124和吉非替尼共同處理H1975細(xì)胞后，其凋亡水平明顯升高。③不同濃度的STAT3特異性抑制劑JSI-124處理H1975細(xì)胞后，Western blot和RT-PCR結(jié)果示伴隨著磷酸化STAT3的蛋白水平和mRNA水平的減少，多藥耐藥蛋白MDR1的蛋白表達(dá)水平及mRNA表達(dá)水平也出現(xiàn)下降。
　　結(jié)論：⑴耐吉非