15d-PGJ2促進(jìn)HBx陽性肝細(xì)胞的凋亡.pdf

1、目的：構(gòu)建轉(zhuǎn)基因細(xì)胞模型HL7702-HBx，觀察HBx基因?qū)L7702細(xì)胞增殖、周期和凋亡的影響，應(yīng)用藥物15d-PGJ2作用HL7702-HBx細(xì)胞及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒組HL7702-NC細(xì)胞，觀察細(xì)胞增殖、周期和凋亡的改變，探討15d-PGJ2在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制和意義。
　　方法：應(yīng)用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染和G418篩選構(gòu)建穩(wěn)定表達(dá)HBx的轉(zhuǎn)基因細(xì)胞HL7702-HBx細(xì)胞，RT-PCR和Western blot鑒定HBx mRNA與蛋

2、白的表達(dá)。分別以四唑藍(lán)（MTT）比色法、流式細(xì)胞術(shù)檢測HL7702-HBx細(xì)胞及對照組HL7702-NC細(xì)胞及應(yīng)用藥物15d-PGJ2作用后的HL7702-HBx細(xì)胞、HL7702-NC細(xì)胞的增殖、周期和凋亡。Western blot檢測各組細(xì)胞中凋亡信號通路Akt、NF-κB、Caspase-3、Bax、Bcl2等蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：HL7702-HBx細(xì)胞中有HBx mRNA和蛋白的表達(dá)，細(xì)胞增殖快與對照組HL7702-N

3、C細(xì)胞有顯著差別（P<0.05）；流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)HL7702-HBx細(xì)胞凋亡率顯著降低，細(xì)胞周期分布顯示其G0/G1期細(xì)胞比例減少，S期細(xì)胞比例明顯增加。應(yīng)用藥物15d-PGJ2作用后，兩株細(xì)胞的增長均受到抑制，抑制率隨藥物濃度增大而升高；進(jìn)行流式檢測后發(fā)現(xiàn)，兩株細(xì)胞的凋亡率均顯著增加，周期分布均表現(xiàn)為G0/G1期細(xì)胞比例顯著增加，S期細(xì)胞比例顯著降低。這些變化均以HL7702-HBx細(xì)胞改變的更顯著。細(xì)胞中凋亡信號通路Akt、NF

4、-κB、Caspase-3、Bax、Bcl2等蛋白的表達(dá)存在顯著變化。
　　結(jié)論：HBx基因通過可促進(jìn)細(xì)胞膜受體凋亡相關(guān)蛋白Akt、NF-κB的表達(dá)，從而抑制細(xì)胞凋亡。在線粒體凋亡通路中，HBx基因促進(jìn)Bax表達(dá)而抑制Bcl2表達(dá)，可促進(jìn)細(xì)胞凋亡。這表現(xiàn)了HBx基因?qū)Φ蛲龅碾p向調(diào)節(jié)作用。應(yīng)用藥物15d-PGJ2作用后，HL7702-HBx細(xì)胞和HL7702細(xì)胞均表現(xiàn)出了促凋亡蛋白的表達(dá)增加，抑制凋亡蛋白的表達(dá)減少，這種改變，在HL