HBx對肝細胞HMGB1表達的影響.pdf

1、目的:構建表達HBx的HBx-pcDNA3.1質粒，觀察HBX對HMGB1的表達的影響;并篩選出能有效抑制HMGB1表達的小干擾RNA，為探索HBX、HMGB1的相互關系奠定實驗基礎。
　　方法:從HepG22.15細胞擴增出野生型HBX基因片段并連接到pcDNA3.1載體質粒，將質粒轉染到兩種不同的肝細胞株（HepG2、LO2細胞），用G418篩選穩(wěn)定表達HBx的細胞，觀察瞬時轉染48小時后及穩(wěn)定表達HBx的細胞系中HMGB1的

2、蛋白表達水平。用Lipo2000脂質體將三種下調HMGB1表達的小干擾RNA(si-RNA)轉入HepG22.15細胞，篩選出干擾HMGB1表達最有效的一種，為進一步研究做準備。
　　結果:HBX基因瞬時轉染48小時后，HepG2及LO2細胞中HMGB1表達均明顯上升;穩(wěn)定細胞系HepG2-HBx建系一個月后，HMGB1表達水平仍較陰性質粒對照組高;穩(wěn)定細胞系LO2-HBx建系若干年后，HMGB1表達水平較空白質粒對照組表達下調。