TFCP2促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌遷移侵襲的分子機(jī)制.pdf

1、背景與目的:
　　 轉(zhuǎn)錄因子TFCP2(transcription factor CP2)高表達(dá)于人肝癌組織并已被確定為促癌基因，其表達(dá)水平與腫瘤的分級(jí)分期相關(guān)。研究表明TFCP2參與了肝癌遷移侵襲、腫瘤血管形成等腫瘤惡性生物學(xué)行為過(guò)程。然而有關(guān)TFCP2發(fā)揮促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移侵襲等生物學(xué)行為過(guò)程的具體機(jī)制仍不明確。本研究旨在闡明TFCP2參與肝癌遷移侵襲的具體分子機(jī)制。
　　 方法:
　　 在高表達(dá)TFCP2的肝

2、癌細(xì)胞系HepG2與BEL-7402中沉默TFCP2的表達(dá)，在低表達(dá)TFCP2的細(xì)胞系Hep3B及SK-HEP-1中過(guò)表達(dá)TFCP2，研究TFCP2對(duì)肝癌細(xì)胞系的增殖、遷移侵襲等惡性生物學(xué)行為的影響。通過(guò)mRNA芯片檢測(cè)HepG2沉默TFCP2后基因表達(dá)譜的改變，通過(guò)GO(Gene Ontology)及pathway分析TFCP2參與的生物學(xué)功能。以及CHIP on chip在SK-HEP-1細(xì)胞中尋找TFCP2對(duì)細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移調(diào)控的潛

3、在靶基因;并用western進(jìn)一步驗(yàn)證TFCP2與候選靶基因之間的調(diào)控模式。通過(guò)TESS軟件預(yù)測(cè)TFCP2與啟動(dòng)子區(qū)域結(jié)合的結(jié)構(gòu)域，并對(duì)啟動(dòng)子全長(zhǎng)進(jìn)行性的5'缺失，通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)TFCP2對(duì)候選靶基因啟動(dòng)子是否具有調(diào)節(jié)作用并確定最小啟動(dòng)區(qū);進(jìn)一步通過(guò)電泳遷移率實(shí)驗(yàn)(EMSA)驗(yàn)證TFCP2對(duì)靶基因最小啟動(dòng)子是否具有直接結(jié)合作用。
　　 結(jié)果:
　　 沉默TFCP2后顯著降低了肝癌細(xì)胞的增殖、遷移侵襲能力;相反

4、過(guò)表達(dá)TFCP2可提高肝癌細(xì)胞的增殖、遷移侵襲能力。mRNA芯片檢測(cè)HepG2沉默后基因轉(zhuǎn)錄組水平的改變，發(fā)現(xiàn)TFCP2調(diào)控的諸多通路與肝癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)功能有關(guān);SK-HEP-1細(xì)胞中的CHIP on chip進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞遷移侵襲相關(guān)分子FN1(fibronectin1)及TJP1(tight junction protein1)的啟動(dòng)子有結(jié)合作用。Western確定了TFCP2正向調(diào)節(jié)FN1以及反向調(diào)節(jié)TJP1的作用，從而實(shí)現(xiàn)

5、對(duì)肝癌細(xì)胞遷移侵襲能力的調(diào)控。熒光雙報(bào)告檢測(cè)發(fā)現(xiàn)TFCP2對(duì)FN1啟動(dòng)子具有正向調(diào)節(jié)作用，并鑒定最小啟動(dòng)子(-471～-271)，EMSA實(shí)驗(yàn)證實(shí)了FN1最小啟動(dòng)子區(qū)域存在與TFCP2結(jié)合的順式作用元件。
　　 結(jié)論:
　　 本研究首次闡明TFCP2在促進(jìn)肝癌細(xì)胞遷移侵襲過(guò)程中的分子機(jī)制，TFCP2通過(guò)上調(diào)FN1及下調(diào)TJP1進(jìn)而調(diào)節(jié)細(xì)胞的遷移侵襲能力。并進(jìn)一步鑒定轉(zhuǎn)錄因子TFCP2對(duì)FN1實(shí)現(xiàn)調(diào)控的最小啟動(dòng)子及其發(fā)揮結(jié)