免疫層析法和電化學免疫方法檢測癌胚抗原的研究.pdf

1、自從Gold和Freedman1965年發(fā)現(xiàn)癌胚抗原(CEA)以后，CEA作為一種腫瘤標志物被廣泛的用于臨床診斷，例如：肺癌、乳腺癌、結直腸癌、子宮頸癌等。血清中的CEA濃度與腫瘤的分期有關，它可作為治療效果、腫瘤是否復發(fā)以及轉(zhuǎn)移的評估標準。因此，建立快速、準確的CEA定量檢測方法對于腫瘤的監(jiān)測和治療具有重大意義。
　　 本文使用金納米粒子、硫化鉛納米粒子、磁性微球制備了金標免疫層析試紙條和電化學免疫傳感器用于CEA的定量檢測，

2、建立了CEA的定量檢測方法并用于實際樣品的測定。本論文主要內(nèi)容包括：
　　 一.免疫層析試紙條的制備及其在CEA定量檢測中的應用
　　 結合金納米粒子獨特的光學性質(zhì)以及抗原抗體特異性分子識別反應，我們制備了一種定量免疫層析試紙條生物傳感器，將此生物傳感器與便攜式讀條機聯(lián)用即可實現(xiàn)人血清中CEA的定量檢測。此傳感器是基于三明治夾心免疫反應進行檢測的。實驗中，多克隆抗體和納米金標記單克隆抗體被用于CEA的特異性識別。CEA的

3、定量檢測通過使用便攜式讀條機檢測反應后試紙條上的紅線光學信號強度來實現(xiàn)。在最佳條件下，檢測的信號強度與CEA濃度在10-200 ng mL-1范圍呈線性關系，檢測限為5 ng mL-1(S/N=3)。進行人血清樣品中CEA的檢測，此生物傳感器得到了比較滿意的結果。免疫層析試紙條生物傳感器為臨床診斷中蛋白質(zhì)生物標志物的檢測提供了一種快速、靈敏、低廉的檢測方法。
　　 二.硫化鉛納米粒子(PbS NP)標記的電化學免疫分析法在CEA

4、定量檢測中的應用
　　 建立了一種基于PbS NP標記的電化學免疫分析法用于癌癥生物標志物CEA的檢測。試驗中制備了立方體PbS NP，用巰基乙酸(TGA)修飾使PbS NP更加穩(wěn)定并提供羧基與CEA抗體連接。使用PbS NP標記CEA單克隆抗體用于免疫識別。在CEA第一抗體(固定在羧基化磁性微球表面)、CEA以及CEA第二抗體(PbS-anti-CEA)之間發(fā)生三明治夾心免疫反應以后，PbS通過抗原抗體的免疫反應被固定到磁性微