豬體外成熟卵母細(xì)胞孤雌激活及胚胎體外發(fā)育的研究.pdf

1、豬卵母細(xì)胞體外成熟、孤雌激活及胚胎體外培養(yǎng)是克隆豬等胚胎工程的重要組成部分。為了給克隆豬的研制提供科學(xué)的技術(shù)參數(shù)，本研究開展了多種培養(yǎng)液對(duì)豬卵母細(xì)胞體外成熟影響的研究，探索了不同激活參數(shù)及聯(lián)合化學(xué)激活對(duì)豬成熟卵母細(xì)胞孤雌激活的效果，以及不同培養(yǎng)基和分別添加生長因子EGF和bFGF對(duì)豬孤雌胚發(fā)育的影響。研究得出如下結(jié)果： 分別用添加了血清和無血清的NCSU-23培養(yǎng)豬卵母細(xì)胞，其成熟率(73.31±3.03％vs68.83±4.6

2、0％)無顯著性差異(P＞0.05)；嘗試用一種新的培養(yǎng)基PZM來培養(yǎng)豬卵母細(xì)胞，與常用培養(yǎng)基NCSU-23和TCM-199對(duì)比，成熟率(56.09±2.12％vs72.43±3.84％vs67.91±5.11％)差異顯著(P＜0.05)，而NCSU-23和TCM-199之間，差異不顯著(P＞0.05)。 體外成熟卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體分別在不同場(chǎng)強(qiáng)，不同脈沖時(shí)程，單次脈沖下激活后，用7.5μg/mlCB處理3-4h，結(jié)果顯示，1.

3、20KV/cm，30μsec組的卵裂率(64.04±1.72％)及囊胚率(24.64±1.79％)高于其它各組，差異顯著(P＜0.05)。而死亡率隨著場(chǎng)強(qiáng)和脈沖時(shí)程的升高而升高。 電脈沖激活聯(lián)合CB、CHX、6-DMAP、CB+CHX、CB+6-DMAP、CHX+6-DMAP、CB+CHX+6-DMAP激活卵母細(xì)胞，結(jié)果顯示，6-DMAP組的卵裂率(80.50±4.52％)和囊胚率(32.22±1.92％)顯著高于其它各組(P＜

4、0.05)，聯(lián)合激活組的囊胚率顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。 三種培養(yǎng)基(PZM-3，NCSU-23，BECM-3)培養(yǎng)豬孤雌胚，結(jié)果為，PZM-3和NCSU-23的卵裂率(69.38±3.99％和69.87±3.16％)、囊胚率(39.91±2.17％和34.37±5.11％)及囊胚細(xì)胞數(shù)(48.38±7.87和38.00±8.57)都顯著高于BECM-3(57.05±4.16，24.63±4.58，15.33±4.51)(

5、P＜0.05)；而PZM-3的囊胚細(xì)胞數(shù)顯著高于NCSU-23(P＜0.05)，2-4細(xì)胞階段添加EGF和，添加EGF組和添加bFGF組的囊胚率(36.20±5.37％和44.25±5.83％)都顯著高于未添加組(19.01±1.72％)(P＜0.05)，添加bFGF組的囊胚細(xì)胞數(shù)高于其它各組，無顯著性差異(P＞0.05)。 上述研究結(jié)果提示：在本研究試驗(yàn)條件下，以初情期前的青年母豬卵母細(xì)胞為試驗(yàn)材料，本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出了較佳的豬卵母