褪黑激素對(duì)黃牛卵母細(xì)胞體外成熟及孤性生殖胚體外發(fā)育的影響.pdf

1、褪黑激素(MLT)是一種吲哚類(lèi)激素,在人及哺乳動(dòng)物體內(nèi)主要是由腦部松果腺分泌,其他器官和細(xì)胞也有少量分泌,分泌量受光照影響比較大,且呈現(xiàn)晝夜節(jié)律性,一般夜晚分泌多,白天分泌少。MLT是一種具有良好水溶性及脂溶性的物質(zhì),能夠透過(guò)細(xì)胞膜及各種膜結(jié)構(gòu)進(jìn)入細(xì)胞器來(lái)發(fā)揮抗氧化作用,還能刺激超氧化物歧化酶、谷胱甘肽還原酶等抗氧化物酶的活性。目前MLT的抗氧化、抗凋亡作用在小鼠、豬、綿羊、雞等動(dòng)物卵母細(xì)胞體外成熟及早期胚胎中均有報(bào)道,但在牛卵母細(xì)胞體

2、外成熟中報(bào)道較少。本研究以牛為試驗(yàn)對(duì)象,研究了褪黑激素對(duì)卵母細(xì)胞體外成熟及胚胎發(fā)育的影響。主要內(nèi)容如下:
　　 1褪黑激素對(duì)牛卵母細(xì)胞成熟和內(nèi)分泌及代謝機(jī)能的影響
　　 (1)褪黑激素對(duì)牛卵母細(xì)胞成熟的影響
　　 取生發(fā)泡期(GV期)牛卵母細(xì)胞940枚,分成4組,分別用含4種濃度(分別為0pmol/ml、10pmol/ml、20pmol/ml和30pmol/ml)MLT體外成熟培養(yǎng)液在38.5℃、5％C02、10

3、0％濕度條件下培養(yǎng)24h,然后比較各組卵母細(xì)胞的成熟率。結(jié)果發(fā)現(xiàn),MLT能提高卵母細(xì)胞成熟率,且隨著濃度的升高,成熟率也呈升高趨勢(shì)。MLT濃度為30pmol/ml組的卵母細(xì)胞成熟率(66.13％)比對(duì)照組(30.36％)高一倍多。
　　 (2)褪黑激素對(duì)卵母細(xì)胞生殖激素分泌的影響
　　 本試驗(yàn)通過(guò)測(cè)定添加外源MLT的成熟液中的激素含量,結(jié)果表明MLT能顯著提高COCs(卵丘卵母細(xì)胞復(fù)合體)的激素分泌從而提高成熟液中激素的

4、含量,其中:孕酮(P)、雌二醇(E2)、促卵泡素(FSH)的分泌是隨MLT濃度的升高呈上升趨勢(shì),MLT濃度為30pmol/ml時(shí)的P水平(0.35 mIU/ml)約為對(duì)照組(0.06 mIU/ml)的6倍；促黃體素(LH)水平在10pmol/ml組和20pmol/ml組比對(duì)照組減少,但是30pmoVml組則高于對(duì)照組(5.42 vs.3.97,P<0.05)。
　　 (3)褪黑激素對(duì)牛卵母細(xì)胞ROS水平的影響
　　 測(cè)定

5、用不同濃度MLT處理的卵母細(xì)胞成熟液中活性氧(ROS)水平,發(fā)現(xiàn)MLT能明顯降低牛卵母細(xì)胞中的ROS水平,這種降低作用與MLT濃度呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。
　　 2褪黑激素對(duì)牛孤雌胚胎發(fā)育的影響及其作用機(jī)制
　　 在胚胎培養(yǎng)液SOF中添加0pmol/ml、10pmol/ml、20pmol/ml、30pmol/ml MLT,培養(yǎng)7d后發(fā)現(xiàn),MLT可以提高孤雌胚胎的卵裂率、桑葚胚率及囊胚率,特別當(dāng)MLT濃度為10pmol/ml時(shí),卵裂

6、率(70.23％)約比對(duì)照(42.32％)高30個(gè)百分點(diǎn),桑葚胚率(66.09％)是對(duì)照組(31.54％)的兩倍多,囊胚率(23.90％)約是對(duì)照組(6.00％)的4倍。
　　 與對(duì)照組相比,囊胚率較高(MLT濃度為10pmol/ml)的組的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)數(shù)、滋養(yǎng)層細(xì)胞數(shù)及總細(xì)胞數(shù)都有顯著增加(34.67 vs.19.66,71.33 vs.43.67,106.00 vs.63.33,P<0.05),說(shuō)明MLT可能通過(guò)提高牛孤雌胚胎的

7、細(xì)胞數(shù)而促進(jìn)胚胎的發(fā)育。
　　 應(yīng)用免疫組化方法檢測(cè)各發(fā)育階段牛孤雌胚胎的MLT受體,證明孤雌胚胎中有MLT受體表達(dá),MLT受體多在胚胎的表面表達(dá),且隨著胚胎的發(fā)育,受體的表達(dá)有增多的趨勢(shì)。
　　 3褪黑激素對(duì)牛孤雄胚胎發(fā)育的影響
　　 在胚胎培養(yǎng)液SOF中添加0pmol/ml、10pmol/ml、20pmol/ml、30pmol/ml MLT,培養(yǎng)7d后,發(fā)現(xiàn)MLT可以提高孤雄胚胎的卵裂率、桑葚胚率及囊胚率,卵