豬卵母細(xì)胞體外成熟培養(yǎng)及胚胎移植手術(shù)方法的研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)主要分為兩部分，一是豬卵母細(xì)胞的體外培養(yǎng)，二是豬胚胎移植手術(shù)法的介紹，這兩部分實(shí)驗(yàn)為轉(zhuǎn)基因克隆豬實(shí)驗(yàn)中不可缺少的實(shí)驗(yàn)步驟。
　　豬卵母細(xì)胞體外培養(yǎng)是用保溫瓶將延吉屠宰場豬的卵巢運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后，將卵巢系膜、輸卵管及脂肪組織等剪掉，使用生理鹽水沖洗干凈，采用抽吸法抽取3-8 mm卵泡來收集卵母細(xì)胞，并在體視顯微鏡下挑選出胞質(zhì)均勻有卵丘包圍的卵丘-卵母細(xì)胞復(fù)合體（COCs），用NCSU-37培養(yǎng)液培養(yǎng)。實(shí)驗(yàn)是在飽和濕度、5﹪CO2、

2、38.5℃平衡6-9h，培養(yǎng)22h后換為不加激素的NCSU37培養(yǎng)液再培養(yǎng)48.5h。使用透明質(zhì)酸酶機(jī)械地剝離卵丘細(xì)胞從而獲得裸卵，觀察排出第一級體的細(xì)胞為成熟卵母細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：用NCSU-37培養(yǎng)液培養(yǎng)的卵母細(xì)胞體外成熟率為74.64±3.78﹪。
　　豬胚胎移植手術(shù)的實(shí)驗(yàn)是以自然發(fā)情的經(jīng)產(chǎn)長白母豬作為胚胎移植手術(shù)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，采用耳緣靜脈注射復(fù)方氯胺酮進(jìn)行全身麻醉，手術(shù)在倒數(shù)第一對乳頭和第二對乳頭之間的腹中線上做切口，胚胎移植