植物病毒金免疫層析試紙條的研制和應(yīng)用.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)是將免疫層析和金標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來(lái)，研究一種能夠快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的方法來(lái)檢測(cè)植物病毒。用提純植物病毒免疫兔子和克隆病毒外殼蛋白基因然后原核表達(dá)，回收蛋白，再免疫兔子兩種方法制備了煙草花葉病毒、李屬壞死環(huán)斑病毒等病毒的抗體，所得多克隆抗體效價(jià)和特異性都比較理想。本實(shí)驗(yàn)以煙草花葉病毒為主要模式病毒進(jìn)行了系統(tǒng)研究。 所研制的煙草花葉病毒膠體金免疫層析試紙條，檢測(cè)試劑為噴涂在結(jié)合釋放墊即玻璃纖維上的膠體金標(biāo)記的兔抗TMV的多克隆抗體

2、，捕獲試劑為包被在硝酸纖維素膜上的兔抗TMV的多克隆抗體。用該試紙條檢測(cè)TMV的標(biāo)準(zhǔn)液時(shí)，檢測(cè)下限為50ng/ml。這一靈敏度達(dá)到了國(guó)外進(jìn)口的試紙條檢測(cè)水平。交叉反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果表明，該試紙條與PVX、ZYMV、WMV、PenMV、CYMV以及PNRSV等病毒均無(wú)交叉反應(yīng)。在特異性方面，該方法與ELISA方法進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示兩種方法的相符率達(dá)到98％。此外，本實(shí)驗(yàn)也成功研制了馬鈴薯X病毒(PVX)、白草花葉病毒(PenMV)的檢測(cè)試紙條

3、，其檢測(cè)靈敏度分別為100ng/ml和200ng/ml，其都能達(dá)到實(shí)際應(yīng)用的效果。 本實(shí)驗(yàn)也研究了煙草葉片中不同的成分，如DNA、RNA、葉綠素等對(duì)試紙條靈敏度的影響。結(jié)果表明煙草葉片中的成分對(duì)試紙條的檢測(cè)下限沒有影響；但極端bH值對(duì)試紙條的檢測(cè)靈敏度有很大影響。 該試紙條最大的優(yōu)點(diǎn)在于無(wú)需借助實(shí)驗(yàn)室的設(shè)備，只需要取少量的植物汁液滴在試紙條上的樣品墊上，便可以在十五分鐘內(nèi)得到檢測(cè)結(jié)果，適合對(duì)一些檢疫性植物病毒當(dāng)場(chǎng)、即時(shí)地