Eg5、PCNA在人膀胱癌組織的表達(dá)及其對(duì)膀胱癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、【背景與目的】
　　在我國(guó),膀胱癌發(fā)病率居男性泌尿系統(tǒng)腫瘤第一位,死亡率居第二位,其中絕大多數(shù)為膀胱移行細(xì)胞癌,由于具有復(fù)發(fā)性、侵襲性、產(chǎn)生獲得性耐藥等特點(diǎn),其治療效果常不理想。所以尋找與膀胱癌惡性生物學(xué)行為密切相關(guān)的生物學(xué)標(biāo)記,并根據(jù)其生物學(xué)特點(diǎn)利用合理而及時(shí)的治療方法,提高膀胱癌患者的總體生存率,一直是臨床醫(yī)生研究的重要課題之一。
　　紡錘體驅(qū)動(dòng)蛋白Eg5是驅(qū)動(dòng)蛋白超家族中成員之一,是有絲分裂的關(guān)鍵蛋白,參與細(xì)胞增殖。有

2、學(xué)者研究表明人類多種惡性腫瘤(例如腎癌、胰腺癌)組織中
　　存在Eg5表達(dá)失控,其高表達(dá)被認(rèn)為與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。PCNA是與細(xì)胞增殖周期有關(guān)的蛋白,能客觀評(píng)估腫瘤細(xì)胞生物學(xué)活性和所處的生長(zhǎng)狀態(tài),而處于靜止?fàn)顟B(tài)的細(xì)胞PCNA呈陰性表達(dá),因此PCNA被用來作為腫瘤增殖的標(biāo)志。
　　Eg5參與腫瘤細(xì)胞增殖,在膀胱癌中研究少見,而PCNA是最常使用的腫瘤細(xì)胞增殖的標(biāo)志,廣泛應(yīng)用于評(píng)估腫瘤增殖能力,二者在膀胱移行細(xì)胞癌之間的相

3、關(guān)性尚未見報(bào)道,二者是否具有協(xié)同促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖作用,其預(yù)后價(jià)值是否具有實(shí)用價(jià)值等都有待進(jìn)一步證實(shí)。鑒于此,本研究運(yùn)用免疫組化法檢測(cè) Eg5和PCNA在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)情況,對(duì)二者間相關(guān)性進(jìn)行初步研究,旨在了解其在膀胱腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及臨床意義;利用siRNA干擾T24細(xì)胞中Eg5蛋白表達(dá),探討其對(duì)T24細(xì)胞生物行為的影響。
　　【方法】
　　1.本實(shí)驗(yàn)收集12例正常膀胱黏膜組織和44例外科手術(shù)切除膀胱癌標(biāo)本,應(yīng)

4、用免疫組化SP法檢測(cè)不同臨床分期及病理分級(jí)的BTCC標(biāo)本和正常膀胱黏膜組織中Eg5和PCNA表達(dá)情況,并對(duì)兩者表達(dá)情況與BTCC臨床分期、病理分級(jí)及預(yù)后情況、兩者在BTCC中表達(dá)有無相關(guān)性進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析。
　　2.化學(xué)合成針對(duì)Eg5的小干擾RNA,通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至T24細(xì)胞中,應(yīng)用Western blot法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后T24細(xì)胞中Eg5蛋白表達(dá),采用臺(tái)盼藍(lán)拒染實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞死亡率,用噻唑藍(lán)(MTT)比色分析法和平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞

5、增殖抑制率,通過細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力。
　　【結(jié)果】
　　1.Eg5和PCNA在BTCC中的陽性率分別為81.8％和77.3%,二者表達(dá)與患者的臨床分期、病理分級(jí)、生存率等有相關(guān)性(P<0.05),BTCC中 Eg5、PCNA蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.447)。
　　2.siRNA干擾可降低Eg5蛋白表達(dá);臺(tái)盼藍(lán)實(shí)驗(yàn)提示,干擾組細(xì)胞死亡顯著高于空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組,干擾組的克隆形成率下降,與空白對(duì)照組和陰性

6、對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;MTT結(jié)果提示,干擾Eg5基因表達(dá)后,T24細(xì)胞的增殖率明顯下降;劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示干擾組細(xì)胞遷移能力受到明顯抑制(P<0.05)
　　【結(jié)論】
　　1.Eg5、PCNA在BTCC組織中高表達(dá),且與BTCC的臨床及病理學(xué)分期分級(jí)密切相關(guān),在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展中起重要作用,可作為判斷預(yù)后的指標(biāo)。
　　2.Eg5基因在膀胱移行細(xì)胞癌起重要作用,干擾Eg5基因能有效抑制T24細(xì)胞的增殖與遷移,加速細(xì)胞