我國(guó)部分省區(qū)雞傳染性法氏囊病病毒分離株的分子流行病學(xué)研究.pdf

1、雞傳染性法氏囊病是由雞傳染性法氏囊病病毒引起的一種急性、高度接觸性傳染病。病毒主要侵害雛雞法氏囊等免疫器官中未成熟的B淋巴細(xì)胞或B淋巴前體細(xì)胞，使雞群產(chǎn)生嚴(yán)重、長(zhǎng)期的免疫抑制，從而對(duì)其它病毒性或細(xì)菌性繼發(fā)感染的敏感性增加，對(duì)各種疫苗應(yīng)答下降，甚至引起免疫失敗，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。 為了解目前我國(guó)養(yǎng)雞生產(chǎn)上IBDV的流行情況及其分子流行病學(xué)的特征，應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室已建立的逆轉(zhuǎn)錄酶一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(reversetranscrip

2、tase polymerase chain reaction，RT-PCR)技術(shù)，對(duì)2003.9～2006.3期間收集于廣西(包括南寧、北海、玉林)、江蘇、浙江、安徽各地的臨床疑似傳染性法氏囊病(infectious bursal disease，IBD)病雞的法氏囊組織、骨髓和脾臟等器官進(jìn)行檢測(cè)；對(duì)檢測(cè)呈陽(yáng)性的病料采用9～1l天齡的雞胚通過(guò)絨毛尿囊膜(chorio-allantoic membrane，CAM)或雞胚成纖維細(xì)胞接種的方

3、法進(jìn)行雞傳染性法氏囊病病毒(infectious bursal disease virus，IBDV)的分離和傳代(2～3代)；對(duì)致死的雞胚或出現(xiàn)細(xì)胞病變的細(xì)胞分別取其尿囊液和收獲細(xì)胞毒進(jìn)行常規(guī)的細(xì)菌檢查和血凝試驗(yàn)(HA)，陰性者取其CAM和收獲的細(xì)胞毒進(jìn)行IBDV的RT-PCR鑒定。結(jié)果證實(shí)并成功分離到20株IBDV；采用SacI和Sac I兩個(gè)特異性核酸內(nèi)切酶對(duì)分離株的VP2基因高變區(qū)(vVP2)進(jìn)行酶切分析，結(jié)果有10株只有Ssp

4、 I酶位點(diǎn)而無(wú)Sac I酶位點(diǎn)，屬于超強(qiáng)毒株(vvlBDV)，另外10株則只有Sac I酶而無(wú)Ssp I酶位點(diǎn)，屬于經(jīng)典毒株(cIBDV)。本研究的結(jié)果證實(shí)，IBDV的感染廣泛存在于商業(yè)雞群中，而且流行的毒株屬vvIBDV和clBDV，而未發(fā)現(xiàn)變異株的存在。 為了解現(xiàn)場(chǎng)流行毒株的關(guān)鍵基因的遺傳變異情況，研究應(yīng)用RT-PCR技術(shù)對(duì)分離自廣西、江蘇、浙江、安徽四個(gè)省的22個(gè)IBDV分離株以及5株中等和中等偏強(qiáng)毒力商品疫苗株B87(

5、in)、B87(BJ)、FW2512、Bursine-2、YSLMB的VP2基因高變區(qū)(vVP2)進(jìn)行擴(kuò)增及其核苷酸序列的測(cè)定，將獲得的序列與其它vvIBDV參考毒株DV86、UK661、OKYM、HK46、GX、GX8／99、JS30-99、SDl-97、ZJ2000，cIBDV參考毒株STC，中等毒力株MB、Bur-706，弱毒疫苗株B87、Cul以及變異株GLS進(jìn)行核苷酸及其推導(dǎo)的氨基酸序列差異的比較分析，并繪制其遺傳系譜樹。結(jié)果

6、發(fā)現(xiàn)，根據(jù)病毒vVP2內(nèi)關(guān)鍵位點(diǎn)氨基酸的特征可將22個(gè)分離株分為3類：第1類屬于vvIBDV，包括BH09、BH11、JS1、JS7、YY1、YY6、YL051、050222、TSC-2(9)、Tz③共10株；第2類屬于中等偏強(qiáng)毒力株，包括040124、YL052兩株；第3類屬于弱毒疫苗株，有020180、YLZF2、040131、BH15、YY2、050045、050057、050258、TSC-1(3)、A038共10株；核苷酸同源

7、性的比較發(fā)現(xiàn)，10株vvIBDV分離株與日本vvlBDV毒株OKYM、中國(guó)株JS30-99和歐洲vvlBDV毒株DV86的同源性高達(dá)96.5％～99.1％，而與clBDV參考毒株STC、弱毒株和變異株GLS的核苷酸同源性分別僅有90.7％～95.6％、91.8％～94.3％、87.8％～89.7％；2株中等毒力分離株與B87(in)、FW2512的同源性高達(dá)100％；10株屬于弱毒的分離株與弱毒疫苗株B87、CU1的同源性高達(dá)為98.3

8、％～100％；繪制的遺傳系譜樹顯示，22個(gè)IBDV分離株可明顯分為2群：第1群包括屬于vvIBDV的10個(gè)分離株和1株IBDV中等偏強(qiáng)毒力商品疫苗株YSLMB，與JS30-99、OKYM、DV86和UK661同在一個(gè)分支上;第2群包括12個(gè)毒力中等及中等偏強(qiáng)毒株以及弱毒株，與CU1、B87、FW2512、Bursine-2則同在另一分支上；所有分離株VP2基因高變區(qū)的核苷酸及其推導(dǎo)的氨基酸缺乏時(shí)間和地域上的明顯差異。研究的結(jié)果表明，近年