豬12號(hào)染色體上PITPNA和PRPSAP1基因的分離、定位、表達(dá)譜分析以及PSME3和FDXR基因與生產(chǎn)性狀的關(guān)聯(lián)檢測(cè).pdf

1、本論文根據(jù)公共數(shù)據(jù)庫中的ESTs資源,并結(jié)合比較基因定位信息,分離了豬12號(hào)染色體上的兩個(gè)新基因,并對(duì)其進(jìn)行了物理定位以及表達(dá)譜和CDS分析,還對(duì)12號(hào)染色體上的另兩個(gè)基因的多態(tài)位點(diǎn)與部分性狀進(jìn)行了初步的關(guān)聯(lián)檢測(cè)。主要取得了如下結(jié)果:
　　 1.根據(jù)人17號(hào)染色體上的同源基因cDNA序列信息,從ESTs數(shù)據(jù)庫(主要是GeneBank)中搜索豬的同源ESTs,用DNAStar軟件包中的seqMman程序?qū)@得的ESTs拼接成連接群

2、(contig),設(shè)計(jì)特異引物,從豬基因組中分離出PITPNA和PRPSAP1基因片段。
　　 2.采用電子克隆策略,獲得了PITPNA和PRPSAP1基因的全長(zhǎng)CDS序列,推導(dǎo)出了相應(yīng)的氨基酸序列。將推導(dǎo)出的氨基酸序列與其它物種的對(duì)應(yīng)序列進(jìn)行同源性比較,發(fā)現(xiàn)豬的PITPNA和PRPSAP1基因編碼的氨基酸序列與人的相應(yīng)基因編碼的氨基酸序列同源性分別高達(dá)99％和98％。
　　 3.采用豬×嚙齒類體細(xì)胞雜種板將新分離的兩個(gè)

3、基因進(jìn)行染色體區(qū)域定位,具體定位結(jié)果如下:PITPNA基因被定位于SSC12 q11-q15(P=0.9711),與該區(qū)域標(biāo)記間的相關(guān)系數(shù)為r=0.9035；PRPSAP1基因被定位于SSC12 p11-(2/3 p13),P=0.8901,r=1.000。
　　 4.采用豬×倉鼠輻射雜種板將新分離的兩個(gè)基因進(jìn)行染色體精細(xì)定位,具體定位結(jié)果如下:PITPNA基因與S0106緊密連鎖,LOD值為5.99；PRPSAP1基因與S01

4、43和SW2494緊密連鎖,LOD值分別為10.09和8.38。
　　 5.采用半定量RT-PCR方法檢測(cè)了PITPNA基因在成年長(zhǎng)白豬的7種組織和PRPSAP1基因在成年湖北白豬6種組織中的表達(dá)情況。結(jié)果表明:PRPSAP1基因在心臟中表達(dá)較低,在所檢測(cè)的其他組織中均表達(dá),且表達(dá)量無明顯差異；而PITPNA基因除脂肪組織以外在檢測(cè)的其它組織中均可表達(dá),表達(dá)量差異不明顯。
　　 6.采用PCR-RFLP方法檢測(cè)了FDXR

5、基因和PSME3基因兩個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性,并以本實(shí)驗(yàn)室與通城縣畜牧局、種畜場(chǎng)合作建立的有性狀記錄和DNA樣的試驗(yàn)群體為材料,分析了這兩個(gè)基因的SNP多態(tài)位點(diǎn)與部分肉質(zhì)、生長(zhǎng)和胴體性狀的關(guān)聯(lián)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn):①PSME3基因的第182突變位點(diǎn)的不同基因型個(gè)體的臀膘厚(Backfat at the rump)差異極顯著(P<0.01),肉色(Loin colour)和大理石紋(Marblingscore)差異顯著(P<0.05)。②PSME3基因

6、的第182突變位點(diǎn)的GG基因型個(gè)體與AG基因型個(gè)體的臀膘厚差異極顯著(P<0.01)；AA基因型個(gè)體與AG基因型個(gè)體的大理石紋差異極顯著(P<0.01)；AA基因型個(gè)體與AG基因型個(gè)體胸腰結(jié)合處膘厚(Backfat at the loin)、GG基因型個(gè)體與AG基因型個(gè)體的平均背膘厚(Averagebackfat thickness)、GG基因型個(gè)體與AG基因型個(gè)體的肌肉顏色,AA基因型個(gè)體與AG基因型個(gè)體的大理石紋差異顯著(P<0.0