豬SREBPs和CREB-1基因的克隆、染色體定位及其功能研究.pdf

1、膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(sterolregulatoryelementbindingproteins，SREBPs)SREBPs和cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMPresponseelementbindingprotein)CREB-1是體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子，SREBPs主要調(diào)控脂肪酸和膽固醇合成，CREB-1有著更為廣泛的作用。SREBPs家族有三種SREBP蛋白：SREBP-1a、SREBP-1c和SREBP-2。在人上，SREBP-

2、2由22號染色體上的基因編碼。SREBP-1a和SREBP-1c來自17號染色體上的同一基因，由于對這一基因的啟動子選擇不同而產(chǎn)生兩個不同的第一外顯子，但其余外顯子相同。SREBP-1，2的功能各有側(cè)重，SREBP-1c傾向于激活脂肪酸的合成，SREBP-2傾向于激活膽固醇的合成。SREBP-1a是組成型表達，但是能作用于所有含有SRE位點的基因。本研究成功獲得了豬SREBP-2的部分編碼序列和CREB-1的全編碼序列。豬SREBP-2

3、與人和中國倉鼠SREBP-2的核苷酸序列的同源性分別是86.4％和90.9％；CREB-1與人和家鼠的CREB-1的核苷酸序列的同源性分別是95.1％和96.8％。對已經(jīng)公布的SREBP-1c序列也進行了分析，SREBP-1c與人和家鼠的SREBP-1c核苷酸序列的同源性分別是88.5％和78.8％.可見在進化中，這三個基因都是非常保守的。采用輻射性雜交板技術(shù)，將SREBP-2定位在豬的五號染色體末端。實驗結(jié)果與人豬比較基因圖譜的結(jié)果一

4、致。通過半定量PCR的方法，以β-actin基因為內(nèi)參，對SREBPs和CREB-1在梅山豬的十個不同組織的分布情況進行了研究。實驗結(jié)果顯示三個基因都是廣泛表達的，其中SREBP-1在脂肪組織表達水平最高，SREBP-2在肝臟組織表達量最高，而CREB-1主要傾向于在腦組織表達。在豬的主要脂質(zhì)生成器官——脂肪組織中，SREBP-1的表達量高于SREBP-2。 此外，利用基因轉(zhuǎn)染和藥物刺激的方法，對SREBPs的表達調(diào)控進行了研究

5、。用β興奮劑刺激COS7細胞系后發(fā)現(xiàn)CREB-1表達量上升，SREBPs的表達水平下降，特別是主要和脂質(zhì)合成相關(guān)的SREBP-1表達下降十分明顯。實驗表明β興奮劑是通過SREBPs因子，特別是通過SREBP-1來達到抑制脂肪酸合成的作用。CREB-2是激活因子CREB-1的天然抑制劑，通過阻止CREB-1與共轉(zhuǎn)錄因子CREB結(jié)合蛋白(CREBBindingProtein，CBP)的結(jié)合達到抑制效果。發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)染CREB-2的293T細胞系