小膠質(zhì)細胞EGFR通路調(diào)控對脊髓損傷與修復的影響及機制研究.pdf

1、目的：文獻提示活化小膠質(zhì)細胞介導的炎癥反應(yīng)在脊髓創(chuàng)傷繼發(fā)性損傷中起重要作用；EGFR通路和小膠質(zhì)細胞的活化有一定的相關(guān)性。本研究旨在探討EGFR通路的激活與小膠質(zhì)細胞活化相關(guān)炎癥的關(guān)系，EGFR抑制劑對小膠質(zhì)細胞活化相關(guān)炎癥的影響，以及EGFR抑制劑對脊髓繼發(fā)性損傷和損傷后修復的影響。
　　 方法：LPS刺激模擬小膠質(zhì)細胞的炎癥活化，自由落體打擊法建立脊髓創(chuàng)傷大鼠模型。C225或AG1478干預活化細胞或損傷動物。逆轉(zhuǎn)錄PCR和

2、ELISA檢測小膠質(zhì)細胞的IL-1β和TNFa的合成和分泌；免疫熒光法觀察小膠質(zhì)細胞形態(tài)變化，pEGFR的表達，脊髓損傷后膠質(zhì)細胞的活化以及血管的改變；Western Blot檢測EGFR、pEGFR、MAPKs、IL-1β和TNFa的表達；鈣成像技術(shù)和鈣抑制實驗檢測鈣活動在LPS誘導的EGFR磷酸化中的作用；干濕重法評價水腫程度；軸突示蹤檢測軸突修復；BBB評分和CBS評分評估神經(jīng)功能的恢復。
　　 結(jié)果：1）LPS 誘導小膠

3、質(zhì)細胞出現(xiàn)活化形態(tài)，pEGFR表達增高，以及IL-1β和TNFa的mRNA表達和培養(yǎng)上清液中蛋白含量的顯著增高；與LPS 誘導組相比，這些變化在C225干預組和AG1478 干預組被明顯抑制。2）LPS 刺激可迅速引起小膠質(zhì)細胞內(nèi)的鈣活動；EGFR的磷酸化可以被BAPTA/AM或KN62 抑制，但是不能被EGTA 抑制。3）LPS 誘導BV2細胞Erk1/2、JNK和p38的磷酸化增加，以及IL-1β和TNFa的表達升高；此現(xiàn)象可以被C

4、225和AG1478 緩解。U0126，SP600125和SB203580不同程度抑制了LPS 誘導的小膠質(zhì)細胞的IL-1β和TNFa表達。4）在脊髓損傷后，pEGFR的表達顯著增高，并定位于活化的小膠質(zhì)細胞。5）C225和AG1478 抑制脊髓損傷區(qū)pEGFR、Erk1/2和p38MAPK的表達，減少IL-1β和TNFa的表達，減輕組織含水量，減輕膠質(zhì)細胞活化，并緩解脊髓損傷灶附近血管的擴張和高通透性改變；干預同時減輕了膠質(zhì)疤痕的形成