Bcl-2高表達誘導頭頸部鱗癌細胞部分EMT、促進其侵襲和轉移機制研究.pdf

1、頭頸部鱗癌(Head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)是一種嚴重威脅人類生命和健康的惡性表皮腫瘤,為世界六大常見惡性腫瘤之一。由于頭頸部特殊的解剖結構和復雜的功能,HNSCC的診斷與治療一直是我們面臨的挑戰(zhàn)之一。對于早期HNSCC,手術或放療均能獲得良好的效果;但遺憾的是60％的HNSCC就診時已屬晚期(Ⅲ、Ⅳ期),5年生存率徘徊在10％～20％之間,況且,在過去50年,生存率仍然沒有明顯提

2、高。HNSCC易發(fā)生淋巴道轉移,而且高頻率的微轉移臨床難以發(fā)現(xiàn)。因此,揭示HNSCC侵襲與轉移機制具有重要的意義。
　　Bcl-2基因是一種重要的抗凋亡的基因,在許多生物過程如胎盤的發(fā)育、細胞歸巢、腫瘤多藥耐藥、細胞周期調節(jié)、血管新生以及基因調控中發(fā)揮重要的作用。50％以上的腫瘤有Bcl-2高表達,HNSCC也不例外,通常Bcl-2高表達的腫瘤病人療效以及病人預后差,且與腫瘤的侵襲轉移密切相關。然而,Bcl-2高表達促進HNSCC

3、侵襲與轉移的機制尚未闡明。本文研究Bcl-2高表達在HNSCC侵襲與轉移中的作用及其機制。
　　為探討B(tài)cl-2高表達對HNSCC細胞侵襲和轉移能力的影響,在建立Bcl-2高表達的穩(wěn)定轉染HNSCC細胞株的基礎上,皮下接種腫瘤細胞于BALB/c鼠,觀察Bcl-2高表達對HNSCC細胞體內致瘤能力的影響;BALB/c鼠尾靜脈注射腫瘤細胞,觀察Bcl-2高表達對腫瘤細胞肺部轉移能力的影響;采用細胞侵襲、運動和遷移試驗等方法分析Bcl-

4、2高表達對腫瘤細胞體外侵襲與轉移能力的影響;應用FACS檢測Bcl-2高表達對細胞表面黏附分子(Integriα2,Integrinα3,Integrinαv,Integrinα5,Integrinα6,Integrinβ1和Integrinβ4)表達的影響。研究結果顯示:Bcl-2高表達增強HNSCC細胞的體內致瘤能力和肺轉移能力,提高HNSCC細胞的體外運動、遷移和侵襲能力,降低HNSCC細胞黏附能力和細胞表面Integrinα2和

5、Integriuαβ1的表達。
　　為研究Bcl-2高表達促進HNSCC細胞侵襲和轉移的機制,應用Western blotting,FACS,Immunostaining,RT-PCR和Real-time PCR等方法檢測Bcl-2高表達對上皮細胞標志蛋白(E-cadherin,Cytokeratin,ZO1和Dsg3等)和間質細胞標志蛋白(N-cadherin,Fibronectin和Vimentin)表達的影響等;采用熒光素酶

6、報告基因檢測系統(tǒng)分析Bcl-2對N-cadherin啟動子活性的影響等:明膠酶譜法研究Bcl-2高表達對金屬基質蛋白質酶MMP-9的影響;應用siRNA下調N-cadherin的表達,探討N-cadherin對轉移和侵襲的影響;用ERK,FGFR,EGFR阻斷劑U0126,PD174073和AG1478分別阻斷其生物學功能,觀察相關信號通路在Bcl-2促進HNSCC細胞侵襲和轉移的作用。結果顯示:Bcl-2高表達誘導細胞發(fā)生了類似上皮.

7、間質轉型(EMT)的形態(tài)變化,下調上皮細胞標志蛋白(E-cadherin,Cytokeratin,ZO1和Dsg3等)的表達,上調間質細胞標志蛋白(N-cadherin,Fibroneetin和Ximentin)的表達;Bcl-2能激活N-cadherin的啟動子的活性并上調MMP-9的表達;Bcl-2通過N-cadherin/FGFR/ERK信號通路促進HNSCC細胞侵襲與轉移。
　　研究表明:(1)Bcl-2高表達增強HNSC