TGF-β1下調(diào)NK細胞雙信號分子NKG2D-DAP10和2B4-SAP介導HBV持續(xù)性感染.pdf

1、HBV持續(xù)性感染的機制尚有待研究。HBV感染的過程非常復雜，目前按照病史將其分為三個階段的方法越來越被各界所接受，即將其分為：免疫耐受期，免疫活化期和低活動期。在免疫耐受期，大部分病人體內(nèi)病毒具有成熟的逃逸機制來避免被免疫細胞清除，從而發(fā)展成持續(xù)性感染狀態(tài)。過去研究認為，NK細胞在慢性乙肝感染中扮演著重要的角色，然而NK細胞在免疫耐受中所起到作用以及免疫耐受的機制都缺乏進一步的研究。
　　 NK細胞是抗病毒天然免疫反應中最早發(fā)揮

2、作用的免疫細胞。NK細胞殺傷靶細胞功能的活化需要多個活化性受體信號的激活，例如NKG2D和CD244共活化。為了研究持續(xù)性HBV感染中天然免疫反應所發(fā)揮的作用，我們檢測了154例HBV病人和95例正常人樣品。結果發(fā)現(xiàn)，免疫耐受病人外周血NK細胞上NKG2D和CD244表達明顯下降，并且其對應的接頭蛋白DAPIO和SAP也較正常人顯著降低。隨后對于功能的檢測發(fā)現(xiàn)，耐受病人NK細胞分泌干擾素和殺傷功能都顯著下降。這種表型和功能的改變應該與病

3、人體內(nèi)的高TGF-β1表達有關，如果用TGF-β1中和性抗體作用，可以部分恢復表型和功能缺陷。這些研究發(fā)現(xiàn)為日后完善新穎的臨床治療手段提供了理論基礎。
　　 在本研究工作中，我們提供充分的研究證據(jù)證明，高水平的TGF-β1可以降低NK細胞上NKG2D和CD244的表達，并最終導致病人的HBV持續(xù)性感染狀態(tài)：
　　 （一）我們首先發(fā)現(xiàn)免疫耐受病人外周血中NK細胞的NKG2D和CD244表達相對于正常人，免疫活化病人和低活動

4、期病人顯著下降，并且NKG2D和CD244的表達下降還伴隨著其接頭蛋白DAP10和SAP的表達降低。提示我們其NK細胞的活化性信號通路受到影響。
　　 （二）我們發(fā)現(xiàn)病人體內(nèi)交聯(lián)共刺激信號并不能發(fā)揮正常的功能，交聯(lián)二抗不能活化免疫耐受病人NK細胞中的NKG2D和CD244共刺激信號，而且沒有明顯的鈣離子流出現(xiàn)，說明免疫耐受期病人的NK細胞不能有效活化且處于耐受狀態(tài)，并且免疫耐受病人NK細胞殺傷51Cr標記的K562細胞以及分泌I

5、FN-γ的能力均顯著下降。這些結果表明，免疫耐受期病人NK細胞的表型改變可能伴隨著NK細胞功能的改變。
　　 （三）加入TGF-p1中和抗體，可以一定程度上恢復NKG2D和CD244表達。我們用CBA多細胞因子檢測和ELISA實驗來檢測病人和正常人血清中TGF-β1的表達情況，結果顯示，免疫耐受病人體內(nèi)TGF-β1表達要顯著高于其他細胞因子，也顯著高于其他分期的病人和正常人。加入TGF-β1中和抗體后，可以部分恢復NK細胞的功能