EZH2通過抑制NKG2D的表達(dá)調(diào)控NK細(xì)胞的發(fā)育及功能.pdf

1、目的：
　　探討組蛋白甲基化酶EZH2調(diào)控NK細(xì)胞發(fā)育及功能的作用和作用機(jī)制。
　　方法：
　　第一部分：從C57BL6小鼠BM中分選出HSCs，體外誘導(dǎo)分化為NK細(xì)胞，加入抑制劑以抑制EZH2活性，western blotting檢測(cè)分化細(xì)胞中H3K27me3表達(dá)量，流式分析不同分化階段細(xì)胞免疫表型；從人臍帶血(umbilical cord blood，UCB)中分離出CD34+HSCs，體外誘導(dǎo)分化為NK細(xì)胞，加入

2、抑制劑以抑制EZH2活性，western blotting檢測(cè)分化細(xì)胞中H3K27me3表達(dá)量，流式分析在不同分化階段細(xì)胞免疫表型。
　　第二部分：流式分析C57BL6小鼠及人UCB CD34+ HSCs在體外分化不同階段細(xì)胞表面NKG2D表達(dá)量；ChIP-qPCR檢測(cè)抑制EZH2活性前后，體外分化的NK細(xì)胞中NKG2D啟動(dòng)子區(qū)H3K27me3修飾水平變化；細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)檢測(cè)體外分化的NK細(xì)胞的殺傷能力。
　　結(jié)果：
　

3、　第一部分：小鼠HSCs體外分化實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，抑制EZH2活性后，NK細(xì)胞發(fā)育進(jìn)程加快；人UCB CD34+ HSCs體外分化結(jié)果也顯示，抑制EZH2活性后NK細(xì)胞發(fā)育進(jìn)程加快。
　　第二部分：小鼠和人HSCs在體外分化不同階段NKG2D表達(dá)量檢測(cè)結(jié)果顯示，抑制EZH2活性后，NKG2D的表達(dá)量明顯上升；ChIP-qPCR實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，抑制EZH2活性后，NKG2D基因H3K27me3修飾水平明顯下降；細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)顯示，抑制EZ

4、H2活性后，NK細(xì)胞的殺傷能力明顯下降，且殺傷能力同NKG2D密切相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　1、EZH2可以調(diào)控小鼠NK細(xì)胞發(fā)育。抑制EZH2活性后，可以明顯促進(jìn)小鼠NK細(xì)胞發(fā)育。
　　2、EZH2可以調(diào)控人NK細(xì)胞發(fā)育。抑制EZH2活性后，可以明顯促進(jìn)人NK細(xì)胞發(fā)育進(jìn)程。
　　3、EZH2通過調(diào)控NKG2D基因H3K27me3修飾水平以調(diào)節(jié)其表達(dá)，從而促進(jìn)NK細(xì)胞的發(fā)育及其功能。
　　4、抑制EZH2活性后