miR-184在堿燒傷角膜新生血管中的表達(dá)和功能研究.pdf

1、目的:探討miR-184在堿燒傷誘導(dǎo)角膜新生血管形成過(guò)程中的表達(dá)變化和作用機(jī)制，及其對(duì)體外血管新生的影響。
　　方法:堿燒傷誘導(dǎo)大鼠角膜新生血管形成，基質(zhì)膠上建立人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞體外三維培養(yǎng)體系，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)miR-184的體內(nèi)外表達(dá)。生物信息學(xué)方法預(yù)測(cè)并分析miR-184靶基因。體外培養(yǎng)人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞，脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染miR-184 mimic進(jìn)入細(xì)胞中，應(yīng)用MTT、Transwell檢測(cè)方法分別觀察轉(zhuǎn)染

2、后血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移能力的變化，同時(shí)觀察miR-184對(duì)基質(zhì)膠上細(xì)胞體外管腔形成能力的影響。
　　結(jié)果:初步建立起血管新生的體內(nèi)外研究模型，miR-184在堿燒傷大鼠角膜新生血管角膜中的表達(dá)(0.145±0.013)較正常角膜(1.015±0.189)顯著下降(P＜0.01)，而在人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中相對(duì)表達(dá)量極少(0.007±0.004)(P＜0.05)。預(yù)測(cè)的的靶基因與VEGF血管生成信號(hào)通路有關(guān)。miR-184 mim

3、ic有效轉(zhuǎn)染入人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染后48h細(xì)胞光密度值(0.50±0.039)和轉(zhuǎn)染后24h細(xì)胞遷移過(guò)膜數(shù)(55.4±5.857)均較對(duì)照組明顯減少(P＜0.01)，形成管腔樣結(jié)構(gòu)分支點(diǎn)數(shù)(13.33±2.082)較對(duì)照組明顯減少(P＜0.05)。
　　結(jié)論:新生血管進(jìn)程中伴隨著miR-184表達(dá)量降低，miR-184能抑制細(xì)胞的生長(zhǎng)和無(wú)血清誘導(dǎo)的遷移能力，減弱內(nèi)皮細(xì)胞基質(zhì)膠上體外管腔形成能力，可能通過(guò)VEGF血管生成信號(hào)