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1、本實(shí)驗(yàn)以小鼠為模式動(dòng)物,研究了不同溫度條件下囊胚的冷凍保存,OPS管內(nèi)解凍和直接移植,體外受精各發(fā)育階段胚胎的玻璃化冷凍以及解凍后胚胎MMP-2和MMP-9基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)情況,為家畜胚胎的玻璃化冷凍和直接移植提供技術(shù)參數(shù),并試圖從分子水平探討冷凍胚胎妊娠率低和產(chǎn)仔率低的可能原因。 實(shí)驗(yàn)一進(jìn)行了冷凍液篩選,結(jié)果表明,25℃室溫和37℃恒溫臺(tái)條件下,選擇OPS為胚胎承載物,用EDFS30兩步法或者用EFS40一步法均能成功保存小
2、鼠囊胚,25℃室溫不使用恒溫臺(tái)條件下,EDFS40一步法或EFS40兩步法均能達(dá)到理想的冷凍效果;試驗(yàn)二驗(yàn)證了胚胎管內(nèi)解凍和直接移植方法的可行性,結(jié)果顯示,OPS細(xì)段總長(zhǎng)度為2.5cm,EDFS30冷凍液吸入長(zhǎng)度小于1cm時(shí),管內(nèi)解凍與管外解凍后胚胎發(fā)育率相比無(wú)顯著性差異(P>0.05),將OPS從裝有蔗糖溶液的離心管中移入含有PBS的離心管中浸12min,胚胎的體外發(fā)育率不受影響,并且將管內(nèi)解凍的胚胎用OPS做導(dǎo)管直接移植給假孕受體,
3、胚胎移植受體妊娠率(91.67%),妊娠產(chǎn)仔率(42.42%)與新鮮胚胎(90.9%和40%)和管外解凍胚胎(84.61%和46.91%)差異不顯著(P>0.05),該方法應(yīng)用于小鼠桑椹胚和孵化囊胚后,各自體外發(fā)育率與管外解凍組均無(wú)顯著差異(P>0.05);實(shí)驗(yàn)三系統(tǒng)研究了體外各發(fā)育階段胚胎的冷凍保存,結(jié)果表明,原核胚解凍后囊胚率和孵化囊胚率低于其它各個(gè)發(fā)育階段的胚胎,并且與對(duì)照組有顯著差異(P<0.05)。2-細(xì)胞,4-細(xì)胞,8-細(xì)胞
4、,桑椹胚冷凍保存后其囊胚率和孵化囊胚率在不同發(fā)育階段無(wú)顯著差異(P>0.05)。體內(nèi)發(fā)育實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),冷凍2-細(xì)胞胚胎妊娠產(chǎn)仔率達(dá)57.14%,與新鮮胚胎移植組無(wú)顯著差異(61.61%,P>0.05)。冷凍原核胚移植后獲得較低的妊娠率和產(chǎn)仔率,與對(duì)照差異顯著(P<0.05)。冷凍8-細(xì)胞和4-細(xì)胞胚胎移植后的妊娠率,產(chǎn)仔率都低于其它發(fā)育階段的胚胎,但與新鮮對(duì)照組差異不顯著(P>0.05)。囊胚細(xì)胞記數(shù)表明,除原核胚外,其余發(fā)育階段胚胎都有很
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