牛卵母細(xì)胞玻璃化冷凍保存及胚胎移植的研究.pdf

1、　　本文就牛卵母細(xì)胞玻璃化冷凍保存以及冷凍胚胎移植黃牛進(jìn)行了研究。 一、牛卵母細(xì)胞玻璃化冷凍研究　　以二甲基亞砜(DMSO)和乙二醇(EG)作為冷凍保護(hù)劑，分別用0.25mL細(xì)管和OPS冷凍體外成熟的牛卵母細(xì)胞。解凍后進(jìn)行孤雌激活。試驗(yàn)1：以DMSO+EG作為冷凍液，分別用0.25mL細(xì)管和OPS冷凍培養(yǎng)22h的卵母細(xì)胞，解凍后繼續(xù)培養(yǎng)2h，進(jìn)行孤雌激活。解凍后其形態(tài)完整率分別為90.6﹪和83.2﹪，差異不顯著(P＞0.05

2、)，卵裂率分別為32.3﹪和25.2﹪，差異也不顯著(P＞0.05)；試驗(yàn)2：將成熟培養(yǎng)22h的卵母細(xì)胞分別在4﹪EG中平衡15min，或在10﹪EG中平衡10min后，移入35﹪EG+5﹪PVP中30s，用OPS進(jìn)行冷凍。解凍后繼續(xù)培養(yǎng)2h，進(jìn)行孤雌激活。解凍后其形態(tài)完整率分別為79.4﹪和62.2﹪，差異顯著(P＜0.05)，卵裂率分別為26.5﹪和10.5﹪，差異顯著(P＜0.05)；試驗(yàn)3：分別用DMSO+EG和35﹪EG作為冷

3、凍液，用OPS冷凍成熟培養(yǎng)22h的卵母細(xì)胞，解凍后繼續(xù)培養(yǎng)2h，進(jìn)行孤雌激活。解凍后其形態(tài)完整率分別為83.2﹪和79.4﹪，差異不顯著(P＞0.05)，卵裂率分別為25.2﹪和26.55﹪，差異不顯著(P＞0.05)。以DMSO+EG或35﹪EG+5﹪PVP作為冷凍液，以0.25mL細(xì)管和OPS冷凍牛卵母細(xì)胞均能取得理想的效果。在4﹪EG中預(yù)平衡的卵母細(xì)胞比在10﹪EG中預(yù)處理的冷凍效果好。 二、進(jìn)口冷凍奶牛胚胎移植黃牛試驗(yàn)

4、　　本試驗(yàn)以兩種不同的同期發(fā)情方法，利用黃牛作為胚胎移植受體，移植冷凍進(jìn)口奶牛IVF胚胎。試驗(yàn)1：一次PG法。受體牛注射一次氯前列醇鈉(0.6mg)；試驗(yàn)2：GnRH-PG法。受體牛先注射0.6mg氯前列醇鈉，9天后第一次注射LHRH-A375μg，注射之日為笫0天，第7天注射0.6mg氯前列醇鈉，48h后第二次注射LHRH-A375μg。同期發(fā)情的黃牛經(jīng)直腸觸診黃體合格后，移植進(jìn)口冷凍奶牛IVF胚胎。結(jié)果表明，GnRH-PG處理效果較