小鼠桑椹胚OPS法冷凍-管內(nèi)解凍和直接移植及體外共培養(yǎng)技術(shù)的研究.pdf

1、本研究以小鼠桑椹胚為材料，采用OPS法冷凍保存，研究了冷凍桑椹胚的管內(nèi)解凍和直接移植及解凍后胚胎與子宮單層上皮共培養(yǎng)對胚胎體內(nèi)、外發(fā)育的影響。 實驗一，小鼠桑椹胚OPS法冷凍.管內(nèi)解凍和直接移植技術(shù)的研究。 目的：探索適合小鼠桑椹胚的管內(nèi)解凍程序，為小家畜冷凍胚胎的移植提供技術(shù)參數(shù)。 方法：小鼠桑椹胚采用OPS法冷凍保存，實施一步法和兩步法管內(nèi)解凍程序進行解凍，回收胚胎進行體外培養(yǎng)。并將管內(nèi)解凍最佳組的胚胎用OP

2、S作移植導管，直接移植到受體子宮角中，觀察胚胎的體內(nèi)發(fā)育情況。 結(jié)果：一步OPS法管內(nèi)解凍結(jié)果表明，在0.5 mol/L蔗糖溶液中平衡2～4 min組的囊胚發(fā)育率(93.64％～97.29％)與對照組(100％)無顯著性差異(P>0.05)；兩步OPS法管內(nèi)解凍結(jié)果表明，裝有胚胎的OPS在0.5 mol/L蔗糖中平衡3 min后插入0.25 mol/L蔗糖中平衡2 min組的囊胚發(fā)育率(100％)最佳，同對照組無顯著性差異(P>

3、0.05)；胚胎移植后體內(nèi)發(fā)育結(jié)果表明，管內(nèi)解凍組的產(chǎn)仔率(38.57％)和管外解凍組(42.86％)及新鮮對照組(51.19％)均無顯著性差異(P>0.05)。 結(jié)論： OPS法玻璃化冷凍的小鼠桑椹胚可以進行管內(nèi)解凍和直接移植。 實驗二，玻璃化冷凍胚胎與子宮單層上皮共培養(yǎng)的研究。 目的：本實驗以昆明白系小鼠的桑椹胚為模型，采用冷凍胚胎與子宮單層上皮細胞進行共培養(yǎng)，比較了共培養(yǎng)和單一培養(yǎng)體系中冷凍胚胎體外發(fā)育的差

4、異。 方法：胚胎采用OPS法冷凍，解凍后分別在體外無細胞條件下和在體外以子宮單層上皮細胞為飼養(yǎng)層條件下進行培養(yǎng)，體外觀察胚胎的孵化、粘附、擴展情況。 結(jié)果：胚胎在體外無細胞培養(yǎng)系統(tǒng)中培養(yǎng)，冷凍組胚胎的黏附和擴展率分別與新鮮對照組(40.90％vs62.53％和18.42％vs 37.56％)有顯著差異(P<0.05)；胚胎在體外共培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，冷凍組胚胎孵化、黏附和擴展率分別與新鮮對照組(89.90％vs78.82％、