涎腺腺樣囊性癌腫瘤干細(xì)胞生物學(xué)特性初探.pdf

1、惡性腫瘤是目前危害人類健康的重要疾病之一，其發(fā)病及轉(zhuǎn)移機(jī)制是醫(yī)學(xué)家們正努力研究的課題方向，也直接關(guān)系到腫瘤的防治策略。近年來腫瘤干細(xì)胞學(xué)說的提出為我們重新認(rèn)識腫瘤的本質(zhì)與起源，以及臨床腫瘤治療的研究提供了新的思考方向。 目的:對腺樣囊性癌肺高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株(adenoid cystic carcinoma cell cloneshighly metastatic to the lung ACC-M)中不同表型的腫瘤亞群細(xì)胞的細(xì)胞膜抗

2、原表達(dá)的差異性進(jìn)行研究和分析，為今后進(jìn)一步分離腫瘤干細(xì)胞打下一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法:①采用單細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法了解ACC-M的分裂和增殖的特點(diǎn)，以探討腫瘤干細(xì)胞存在的可能性。②利用MTT比色試驗(yàn)法繪制ACC-M的生長曲線③利用流式細(xì)胞儀(flow cytometry FCM)檢測ACC-M腫瘤細(xì)胞的表面抗原cD24、CD44、ABCG2的表達(dá)情況。④采用免疫組化的方法檢測單細(xì)胞體外培養(yǎng)具有增殖能力的ACC-M腫瘤細(xì)胞與常規(guī)體外傳

3、代培養(yǎng)的ACC-M腫瘤細(xì)胞的CD44、CD24和MMP-9表達(dá)差異度。 結(jié)果:①在單細(xì)胞體外培養(yǎng)6d后，ACC-M單細(xì)胞僅有8.62％持續(xù)分裂、增殖,而并非全部的細(xì)胞都發(fā)生分裂。②ACC-M的生長曲線顯示細(xì)胞的倍增時(shí)間接近48小時(shí)。③免疫組化結(jié)果顯示，單細(xì)胞體外培養(yǎng)具有增殖能力的ACC-M細(xì)胞與常規(guī)傳代培養(yǎng)的ACC-M細(xì)胞相比，兩者在CD24、CD44和MMP-9的表達(dá)上無統(tǒng)計(jì)學(xué)上的差異，CD44和MMP-9在ACC-M細(xì)胞中陽

4、性表達(dá)率很高，CD24在ACC-M細(xì)胞中陽性表達(dá)率較低。④FcM檢測結(jié)果顯示，ACC-M細(xì)胞表面CD44<'+>,ABCG2<'+>和CD44<'+>CD24<'->的表達(dá)率分別為90.67％、8.64％和78.09％。 結(jié)論: ①OACC-M腫瘤細(xì)胞具有異質(zhì)性，并不是所有的ACC-M細(xì)胞都能克隆增殖，只有一小部分細(xì)胞能不斷地分裂增殖，大多數(shù)細(xì)胞最終死亡或凋亡。 ②單細(xì)胞體外培養(yǎng)具有增殖能力的ACC-M細(xì)胞與常規(guī)

5、傳代培養(yǎng)的ACC-M細(xì)胞相比，CD44,CD24和MMP-9的表達(dá)無顯著的增加或降低，因而對于分離ACC-M的腫瘤干細(xì)胞，CD44、CD24和MMP-9缺乏特異性。CD44和MMP-9與腫瘤的高轉(zhuǎn)移性密切相關(guān)。轉(zhuǎn)移潛能高的涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞具有較強(qiáng)的基質(zhì)金屬蛋白酶分泌。 ③Acc-M也象某些實(shí)體瘤一樣含有側(cè)群細(xì)胞(Side population SP)。在后續(xù)的研究中，可考慮利用SP細(xì)胞的表型標(biāo)記“ABCG2”，用FCM或磁珠分