腺樣囊性癌腫瘤干細胞的分離與鑒定.pdf

1、目的：惡性腫瘤是目前危害人類健康最重要的疾病之一，其發(fā)病機制的研究一直是腫瘤學家們所關心的問題，也直接影響著腫瘤的防治策略。近年來腫瘤干細胞概念的提出為腫瘤發(fā)病機制的研究提供了新的切入點。本研究擬對腺樣囊性癌不同表型的腫瘤細胞生物學特性進行分析和研究，試圖為腫瘤干細胞學說提供實驗依據(jù)，證實干細胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的意義。 方法：本研究(1)采用單細胞體外培養(yǎng)的方法了解腺樣囊性癌腫瘤細胞(ACC-2)的分裂、增殖特點，以探討腫瘤干細

2、胞存在的可能性。(2)采用免疫組化的方法檢測ACC-2腫瘤細胞表面CD44和CD24表達的差異性。(3)采用免疫磁珠技術分離不同表型的ACC-2腫瘤細胞。采用單細胞體外培養(yǎng)的方法了解不同表型的ACC-2腫瘤細胞分裂、增殖特點。本實驗將不同表型的ACC-2腫瘤細胞分為五組，即A組CD44+ACC-2、B組CD44+CD24-ACC-2、C組CD44-ACC-2、D組CD44+CD24+ACC-2、E組ACC-2。(4)不同表型腫瘤細胞成瘤

3、能力及分化能力的裸鼠體內實驗，分組同前。(5)采用基因芯片技術，了解不同表型的腫瘤細胞的基因差異。 結果：(1)在體外培養(yǎng)中，ACC-2單細胞僅有4.41％可以分裂、增殖，而并非全部都發(fā)生分裂。(2)不同表型的ACC-2體外單細胞培養(yǎng)實驗發(fā)現(xiàn)，A組腫瘤細胞發(fā)生分裂的比例為10.42％，B組腫瘤細胞發(fā)生分裂的比例為25.71％，C組、D組細胞未發(fā)生持續(xù)分裂。(3)五組腫瘤細胞均接種1×106后2周，接種A組、B組、E組腫瘤細胞的裸

4、鼠腋部皮下可形成移植瘤，而接種C組、D組腫瘤細胞的裸鼠腋下未成瘤；五組腫瘤細胞均接種1×105后3周，A組、B組、E組裸鼠腋下可成瘤，而C組、D組裸鼠腋下未成瘤；五組腫瘤細胞均接種1×104后4周，A組、B組裸鼠腋下可成瘤，C組、D組、E組裸鼠腋下未成瘤；五組腫瘤細胞均接種1×103后8周，僅B組裸鼠腋下可成瘤；五組腫瘤細胞均接種1×102后10周，均未成瘤。(4)免疫組化實驗證實，B組腫瘤細胞具有分化成其他表型腫瘤細胞的能力。(5)經(jīng)

5、基因芯片檢測B組與E組腫瘤細胞一共有502個基因存在差異。其中7個與細胞分化有關，58個與細胞粘連有關，20個與細胞凋亡有關，29個與細胞運動有關，123個與細胞信號傳導有關，265個與細胞代謝有關。 結論：ACC-2腫瘤細胞具有不同的表型，其增殖和轉移能力可能和這部分具有獨特表型的腫瘤細胞關系密切。細胞表面抗原為CD44+CD24-的腫瘤細胞較未分離的ACC-2腫瘤細胞具有更強的增殖能力；CD44+CD24-腫瘤細胞具有分化為

6、其他表型腫瘤細胞的能力。未分離的ACC-2腫瘤細胞與CD44+CD24-ACC-2腫瘤細胞在與細胞分化、凋亡、粘連、信號傳導等有關的基因上存在差異。ACC-2腫瘤細胞的增殖能力可能源于CD44+ACC-2與CD44+CD24-ACC-2腫瘤細胞的增殖能力。本實驗分離出的表面抗原為CD44+CD24-的ACC-2腫瘤細胞較ACC-2腫瘤細胞含有更高比例的腫瘤干細胞。CD44和CD24可能是ACC-2腫瘤干細胞表面標志之一。本實驗為口腔頜面