腺樣囊性癌腫瘤干細(xì)胞的分離與鑒定.pdf

1、目的：惡性腫瘤是目前危害人類健康最重要的疾病之一，其發(fā)病機(jī)制的研究一直是腫瘤學(xué)家們所關(guān)心的問題，也直接影響著腫瘤的防治策略。近年來腫瘤干細(xì)胞概念的提出為腫瘤發(fā)病機(jī)制的研究提供了新的切入點(diǎn)。本研究擬對腺樣囊性癌不同表型的腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特性進(jìn)行分析和研究，試圖為腫瘤干細(xì)胞學(xué)說提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，證實(shí)干細(xì)胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的意義。 方法：本研究(1)采用單細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法了解腺樣囊性癌腫瘤細(xì)胞(ACC-2)的分裂、增殖特點(diǎn)，以探討腫瘤干細(xì)

2、胞存在的可能性。(2)采用免疫組化的方法檢測ACC-2腫瘤細(xì)胞表面CD44和CD24表達(dá)的差異性。(3)采用免疫磁珠技術(shù)分離不同表型的ACC-2腫瘤細(xì)胞。采用單細(xì)胞體外培養(yǎng)的方法了解不同表型的ACC-2腫瘤細(xì)胞分裂、增殖特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)將不同表型的ACC-2腫瘤細(xì)胞分為五組，即A組CD44+ACC-2、B組CD44+CD24-ACC-2、C組CD44-ACC-2、D組CD44+CD24+ACC-2、E組ACC-2。(4)不同表型腫瘤細(xì)胞成瘤

3、能力及分化能力的裸鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，分組同前。(5)采用基因芯片技術(shù)，了解不同表型的腫瘤細(xì)胞的基因差異。 結(jié)果：(1)在體外培養(yǎng)中，ACC-2單細(xì)胞僅有4.41％可以分裂、增殖，而并非全部都發(fā)生分裂。(2)不同表型的ACC-2體外單細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，A組腫瘤細(xì)胞發(fā)生分裂的比例為10.42％，B組腫瘤細(xì)胞發(fā)生分裂的比例為25.71％，C組、D組細(xì)胞未發(fā)生持續(xù)分裂。(3)五組腫瘤細(xì)胞均接種1×106后2周，接種A組、B組、E組腫瘤細(xì)胞的裸

4、鼠腋部皮下可形成移植瘤，而接種C組、D組腫瘤細(xì)胞的裸鼠腋下未成瘤；五組腫瘤細(xì)胞均接種1×105后3周，A組、B組、E組裸鼠腋下可成瘤，而C組、D組裸鼠腋下未成瘤；五組腫瘤細(xì)胞均接種1×104后4周，A組、B組裸鼠腋下可成瘤，C組、D組、E組裸鼠腋下未成瘤；五組腫瘤細(xì)胞均接種1×103后8周，僅B組裸鼠腋下可成瘤；五組腫瘤細(xì)胞均接種1×102后10周，均未成瘤。(4)免疫組化實(shí)驗(yàn)證實(shí)，B組腫瘤細(xì)胞具有分化成其他表型腫瘤細(xì)胞的能力。(5)經(jīng)

5、基因芯片檢測B組與E組腫瘤細(xì)胞一共有502個(gè)基因存在差異。其中7個(gè)與細(xì)胞分化有關(guān)，58個(gè)與細(xì)胞粘連有關(guān)，20個(gè)與細(xì)胞凋亡有關(guān)，29個(gè)與細(xì)胞運(yùn)動(dòng)有關(guān)，123個(gè)與細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)，265個(gè)與細(xì)胞代謝有關(guān)。 結(jié)論：ACC-2腫瘤細(xì)胞具有不同的表型，其增殖和轉(zhuǎn)移能力可能和這部分具有獨(dú)特表型的腫瘤細(xì)胞關(guān)系密切。細(xì)胞表面抗原為CD44+CD24-的腫瘤細(xì)胞較未分離的ACC-2腫瘤細(xì)胞具有更強(qiáng)的增殖能力；CD44+CD24-腫瘤細(xì)胞具有分化為

6、其他表型腫瘤細(xì)胞的能力。未分離的ACC-2腫瘤細(xì)胞與CD44+CD24-ACC-2腫瘤細(xì)胞在與細(xì)胞分化、凋亡、粘連、信號(hào)傳導(dǎo)等有關(guān)的基因上存在差異。ACC-2腫瘤細(xì)胞的增殖能力可能源于CD44+ACC-2與CD44+CD24-ACC-2腫瘤細(xì)胞的增殖能力。本實(shí)驗(yàn)分離出的表面抗原為CD44+CD24-的ACC-2腫瘤細(xì)胞較ACC-2腫瘤細(xì)胞含有更高比例的腫瘤干細(xì)胞。CD44和CD24可能是ACC-2腫瘤干細(xì)胞表面標(biāo)志之一。本實(shí)驗(yàn)為口腔頜面