雌激素對不同ER狀態(tài)乳腺癌細胞株生物學性狀的影響及與FAK的關系.pdf

1、背景： 乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，居女性惡性腫瘤的首位。近年來，乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，發(fā)病年齡也明顯年輕化，嚴重威脅著婦女的健康。 雌激素(estrogen,E2)在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，在對人類乳腺癌細胞所做的實驗中，可見雌激素可增強乳腺癌的侵襲性，并直接或間接促進癌細胞的增殖。 近年來，整合蛋白介導的信號轉導過程中的中心分子.黏著斑激酶(focaladhesionkinase，FA

2、K)的研究備受重視。FAK是細胞漿內非受體酪氨酸激酶，其磷酸化激活是細胞生長和細胞內信號傳導途徑中重要環(huán)節(jié)。近年來研究發(fā)現它與細胞的黏附、增殖、遷移及凋亡密切相關，有胞內第一信號之稱，因此日益受到關注。研究表明，在許多腫瘤組織中都有FAK表達增加，乳腺癌組織中FAK的表達及活性明顯升高，而一般增生和正常乳腺組織中均未見表達，FAK能加速惡性細胞的增殖、浸潤和轉移。 雌激素可在胞漿內經非基因組途徑通過激活細胞漿內的酪氨酸激酶通路來

3、調節(jié)基因的轉錄。而FAK也是生長因子酪氨酸激酶通路中的一環(huán)。研究發(fā)現，在一系列三苯氧胺耐藥乳腺癌細胞系中，FAK活性增加，再用雌激素處理后，FAK活性進一步增加。雌激素受體(estrogenreceptor,ER)可與FAK結合，雌激素可調節(jié)FAK的自動磷酸化，應用FAK/Src阻斷劑可防止或延緩ER陽性乳腺癌的進展及轉移。以上證據說明雌激素及FAK均在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。 目前國內外關于雌激素和FAK的相關性報道不多

4、，本實驗采用體外研究方法，觀察不同濃度雌激素刺激后不同雌激素受體狀態(tài)乳腺癌細胞株生物學性狀的改變及FAK的轉錄表達水平，以進一步了解雌激素及FAK在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用，為今后乳腺癌治療的新靶點提供理論支持。 目的： 檢測不同濃度雌激素作用后不同雌激素受體(ER)狀態(tài)的乳腺癌細胞的增殖、侵襲轉移及FAK的表達情況，探討雌激素與FAK是否通過同一信號傳導通路促進腫瘤細胞的增殖、侵襲轉移及雌激素與FAK是否存在反饋關系。

5、 方法： 采用體外研究方法，觀察不同濃度雌激素刺激后不同雌激素受體狀態(tài)乳腺癌細胞株生物學性狀及FAK的轉錄表達水平。MTT實驗測定不同濃度雌激素處理后腫瘤細胞的存活率并選取適宜雌激素濃度以進行后續(xù)試驗；rranswell法測定不同濃度雌激素處理后腫瘤細胞的侵襲轉移能力；實時RT-PCR檢測不同濃度雌激素處理后腫瘤細胞中FAK基因的轉錄水平；WesternBlot檢測不同濃度雌激素處理后腫瘤細胞中FAK基因的表達水平。綜合

6、分析雌激素及FAK在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展中的作用及相互之間關系。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析，各組間差異用單因素方差分析、LSD-t檢驗、SNK-q檢驗，多樣本方差齊性檢驗用Levene法。檢驗水準均為α=0.05，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。 結果： 1.本研究結果顯示，在一定范圍內，雌激素對MCF-7細胞具有促生長作用，到達1×10-9mol/L對MCF-7細胞的促生長作用進入平臺期；而任何濃度的雌激素對

7、MDA-MB-231細胞均無促生長作用。并篩選出后續(xù)實驗的雌激素濃度分別為：0mol/L;1×10-11mol/L;1×10-10mol/L；1×10-9mol/L。 2.隨雌激素濃度的逐漸升高，MCF-7細胞侵入濾膜的數量也逐漸增多，對照組與各處理組之間及各處理組兩兩之間差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；不同濃度雌激素處理后，不同處理組MDA-MB-231細胞侵入濾膜的數量與對照組比較無明顯差異(P＞0.05)，各處理組之間

8、的差異也無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 3.RT-PCR試驗結果顯示，隨雌激素濃度逐漸升高，MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞中FAK基因表達并未相應提高，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 4.WesternBlot檢測結果顯示，隨雌激素濃度逐漸提高，MCF-7細胞和MDA-MB-231細胞FAK基因的蛋白表達并未隨之升高，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 結論： 雌激素可促進ER陽性乳腺癌細胞