人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞對(duì)乳腺癌細(xì)胞株增殖和遷移的影響及機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:
　　本研究總的目標(biāo)是研究人臍帶間質(zhì)干細(xì)胞(hUC-MSC)對(duì)乳腺癌細(xì)胞株（MCF-7和MDA-MB231）增殖和遷移的影響及可能的作用機(jī)制，為乳腺癌的診斷治療提供新的治療策略，為MSCs臨床應(yīng)用的安全性和可行性提供新的基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　具體目標(biāo)包括:
　　1.分離培養(yǎng)、鑒定臍帶間質(zhì)干細(xì)胞以及收集上清培養(yǎng)基。
　　2.探討hUC-MSC在體外對(duì)乳腺癌細(xì)胞株增殖和遷移的影響。
　　3.研究hUC

2、-MSC對(duì)乳腺癌細(xì)胞株增殖和遷移的作用機(jī)制。
　　研究方法:
　　(1)采用臍帶組織塊貼壁法分離培養(yǎng)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞并進(jìn)行鑒定，取第3-5代用于本實(shí)驗(yàn)。
　　(2)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞上清培養(yǎng)基的收集。
　　(3)運(yùn)用MTT法檢測(cè)臍帶間質(zhì)干細(xì)胞上清培養(yǎng)基對(duì)MCF-7、MDA-MB231增殖的影響，用平板克隆形成實(shí)驗(yàn)來分析MSCs上清培養(yǎng)基對(duì)兩種細(xì)胞株單個(gè)細(xì)胞增殖的研究。
　　(4)用劃痕、Transwell遷移實(shí)驗(yàn)

3、分析MSCs上清培養(yǎng)基對(duì)MCF-7、MDA-MB231遷移的作用。
　　(5) PCR檢測(cè)E-cadherin和N-cadherin基因的表達(dá)，Western-blot檢測(cè)相關(guān)蛋白E-cadherin、N-cadherin、p-ERK、PCNA、ZEB1盼變化。
　　(6)應(yīng)用體外MTT、Transwell實(shí)驗(yàn)和Western-blot檢測(cè)用ERK抑制劑U0126和MSC的上清培養(yǎng)基共同處理MCF-7、MDA-MB231細(xì)胞

4、后，其體外增殖、遷移的變化和相關(guān)蛋白表達(dá)的改變。
　　研究結(jié)果:
　　(1)經(jīng)過分離培養(yǎng)，細(xì)胞的形念為長(zhǎng)梭形，呈漩渦樣生長(zhǎng)，流式細(xì)胞表面標(biāo)記的結(jié)果為CD44，CD90，CD29為陽性，CD34，HLA-DR為陰性。成骨染色為陽性結(jié)果，成脂誘導(dǎo)后有脂滴出現(xiàn)，經(jīng)過以上分離鑒定為臍帶間質(zhì)干細(xì)胞。
　　(2)MTT結(jié)果分析:臍帶間質(zhì)干細(xì)胞上清培養(yǎng)基作用后促進(jìn)了MCF-7、MDA-MB231細(xì)胞的生長(zhǎng)。
　　(3)經(jīng)過遷移

5、實(shí)驗(yàn)分析，MSCs CM對(duì)MCF-7和MDA-MB231遷移產(chǎn)生促進(jìn)作用。
　　(4) PCR結(jié)果:E-cadherin表達(dá)下降，Ⅳ-cadherin表達(dá)上升，這與Western-blot的檢測(cè)結(jié)果一致。Western-blot還檢測(cè)了p-ERK，ZEB1，PCNA的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)MSCs上清培養(yǎng)基處理后p-ERK，ZEB1及PCNA都有不同程度的升高。
　　(5)用U0126處理乳腺癌細(xì)胞后發(fā)現(xiàn):其增殖和遷移能力下降，West

6、ern-blot的檢測(cè)結(jié)果E-eadherin表達(dá)上升，N-cadherin表達(dá)下降。而p-ERK，ZEB1及PCNA都有不同程度的表達(dá)下降。
　　結(jié)論:
　　(1) hUC-MSCs上清培養(yǎng)基可以促進(jìn)MCF-7、MDA-MB231的增殖。
　　(2) hUC-MSCs上清培養(yǎng)基可以提高M(jìn)CF-7、MDA-MB231的遷移能力。
　　(3) hUC-MSCs促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的遷移可能是通過EMT的發(fā)生發(fā)揮作用的。<